GeticoDye Terminator v1.1 和 v3.1 5X 测序缓冲液是专为荧光法循环测序反应设计的核心辅助试剂，隶属于 GeticoDye Terminator 系列测序体系，主要功能是为测序反应提供稳定、优化的离子环境与 pH 条件，同时可用于稀释 GeticoDye Terminator Ready Reaction Mix（2.5X 浓度），使其在测序反应中达到 1X 终浓度，最终保障 Sanger 测序（一代测序）结果的准确性、重复性与长读长性能。该缓冲液适配单链 DNA、双链 DNA、PCR 片段、BAC 克隆等多种类型的 DNA 模板，可与 Minor Variant Finder 软件配合使用，实现低至 5% 频率的样本变异检测，广泛适用于基础科研、分子诊断前期研究等场景的基因序列分析。
订购信息
货号 | 规格 | 价格 |
210101 | 1ml | 980.00 |
| 210102 | 28ml | 16800.00 |
210103 | 233ml | 138000.00 |
GeticoDye Terminator v1.1 和 v3.1 5X 测序缓冲液是专为荧光法循环测序反应设计的核心辅助试剂，隶属于 GeticoDye Terminator 系列测序体系，主要功能是为测序反应提供稳定、优化的离子环境与 pH 条件，同时可用于稀释 GeticoDye Terminator Ready Reaction Mix（2.5X 浓度），使其在测序反应中达到 1X 终浓度，最终保障 Sanger 测序（一代测序）结果的准确性、重复性与长读长性能。
该缓冲液适配单链 DNA、双链 DNA、PCR 片段、BAC 克隆等多种类型的 DNA 模板，可与 Minor Variant Finder 软件配合使用，实现低至 5% 频率的样本变异检测，广泛适用于基础科研、分子诊断前期研究等场景的基因序列分析。
该缓冲液作为一代测序核心辅助试剂，可完美匹配多款主流一代测序仪，尤其针对 3730/3730xl DNA Analyzer（3730XL 测序仪）具备优化的兼容性，同时支持以下仪器型号：
• SeqStudio™ Genetic Analyzer
• SeqStudio™ Flex Series Genetic Analyzer
• 3500/3500xL Genetic Analyzer
在搭配上述仪器使用时，需根据仪器类型选择对应的电泳模块与 mobility 文件（如适配 3730xl 测序仪时，推荐使用 KB_3730_POP7_BDTv3.mob 等专用 mobility 文件），并结合仪器操作指南完成测序流程，确保数据质量。
测序反应的热循环步骤可适配 Applied Biosystems™ 系列专用热循环仪，也可兼容其他品牌热循环仪（需根据仪器特性优化循环条件），推荐适配型号包括：
• GeneAmp™ PCR System 9700 Dual 96-Well
• GeneAmp™ PCR System 9700 Dual 384-Well
• Veriti™ Fast 96‑Well Thermal Cycler
• Veriti™ 384‑Well Thermal Cycler
使用非推荐热循环仪时，需注意控制升温速率（建议 ≤1°C / 秒），避免因升温过快导致测序数据噪声增加。
该缓冲液通常作为 GeticoDye Terminator v3.1 循环测序试剂盒的组成部分，可以单独销售。
• 存储温度：4°C 冷藏保存，无需冷冻；
• 避光要求：无需额外避光，但需避免与试剂盒中含荧光染料的组分（如 Ready Reaction Mix）长期共同暴露于强光环境；
• 冻融限制：避免反复冻融，建议根据单次使用量分装为小体积（如 100 μL / 管），分装后仍需 4°C 保存，分装后使用周期不超过 1 个月；
• 使用状态：使用前需在室温或冰上自然解冻，解冻后轻轻涡旋混匀（2-3 秒），并短暂离心（2-3 秒）使液体集中于管底，全程避免加热。
该缓冲液的核心用途是稀释 GeticoDye Terminator Ready Reaction Mix（2.5X），以 20 μL 终体积的 0.5X 稀释反应为例，典型反应体系配置如下：
组分 | 体积（20 μL 反应） | 说明 |
GeticoDye Terminator 3.1 Ready Reaction Mix（2.5X） | 4 μL | 提供测序所需的荧光终止子与 DNA 聚合酶 |
GeticoDye Terminator v1.1 & v3.1 5X 测序缓冲液 | 2 μL | 稀释反应体系至 1X 终浓度 |
引物（3.2 μM，如 -21 M13 对照引物） | 2 μL（3.2 pmol） | 若使用 0.8 pmol/μL 对照引物，需加 8 μL |
DNA 模板 | 2 μL | 参考模板用量标准（如双链 DNA 150-300 ng/μL） |
无酶无 RNase 水 | 10 μL | 补足体积至 20 μL，需根据模板 / 引物实际体积调整 |
注：缓冲液稀释比例需严格按照公式计算（缓冲液体积 = 0.5×(总反应体积 / 2.5) - Ready Reaction Mix 体积），未优化的稀释比例可能导致测序质量下降，不建议随意调整。
1. 试剂混用禁忌：仅可与 GeticoDye Terminator v1.1 或 v3.1 系列的 Ready Reaction Mix 搭配，不可用于其他品牌或版本的测序试剂；
2. 污染防控：使用专用移液器与无酶无 RNase 耗材，避免交叉污染；缓冲液管口避免接触反应管或其他试剂，使用后及时盖紧管盖；
3. 反应后处理：含该缓冲液的测序反应完成后，需通过 BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒或乙醇 / EDTA 沉淀法纯化（去除未结合的染料终止子与盐类），再进行 capillary electrophoresis（毛细管电泳）；
4. 对照实验：每次实验建议设置含 pREF-BDT™ 对照 DNA（200 ng/μL）的对照反应，以验证缓冲液活性与测序体系有效性。
1. 性能稳定性：采用高纯度原料与严格的生产质控，批次间差异小，可保障测序反应的离子浓度与 pH 稳定，提升数据重复性（读长可最大化至仪器上限）；
2. 适配灵活性：同时兼容 v1.1 与 v3.1 两个版本的 GeticoDye Terminator 测序体系，无需为不同版本试剂单独采购缓冲液；
3. 操作便捷性：预混 5X 浓度设计，无需手动配制缓冲液组分，直接按比例添加即可，简化实验流程；
4. 仪器兼容性广：针对 3730XL 等主流一代测序仪进行优化，可直接适配仪器默认的测序模块与数据分析参数，降低方法开发难度。
若使用过程中出现测序数据异常，可结合以下与缓冲液相关的排查方向解决：
常见问题 | 可能原因（与缓冲液相关） | 解决方案 |
信号强度低 | 缓冲液稀释比例错误；缓冲液反复冻融失效 | 重新核对稀释公式，使用未反复冻融的缓冲液重新实验 |
数据噪声高 | 缓冲液污染；缓冲液与其他试剂混合不均匀 | 更换新批次缓冲液，使用前充分涡旋混匀并短暂离心 |
5' 端测序质量差 | 缓冲液与 POP-7™ 聚合物搭配使用（v3.1 体系） | 若需提升 5' 端质量，可搭配 POP-6™ 聚合物与 v1.1 体系使用 |
A1：该缓冲液是荧光法循环测序反应的核心辅助试剂，主要用于两个关键场景：一是为 GeticoDye Terminator v1.1 或 v3.1 系列测序反应提供稳定的离子环境与 pH 条件，保障测序反应高效进行；二是稀释 GeticoDye Terminator Ready Reaction Mix（2.5X 浓度），使其在测序体系中达到 1X 终浓度，最终确保 Sanger 测序（一代测序）结果的准确性、重复性与长读长性能。
A2：可以完全平替。从核心功能、适配体系、仪器兼容性到使用方法，GeticoDye Terminator v1.1 和 v3.1 5X 测序缓冲液均与赛默飞 BigDye™ Terminator v1.1 & v3.1 5X Sequencing Buffer 保持一致：
• 适配相同版本的测序体系（v1.1 和 v3.1 系列 Ready Reaction Mix）；
• 兼容同款一代测序仪（如 3730XL、3500/3500xL、SeqStudio 系列等）；
• 反应体系配置比例、稀释公式、存储条件完全通用，无需调整实验参数即可直接替换使用，且测序数据质量（读长、信号强度、重复性）与原产品无差异。
A3：在模板适配方面，可兼容单链 DNA、双链 DNA、PCR 片段（100 bp-2000+ bp）、BAC 克隆、黏粒等多种类型的 DNA 模板，满足基础科研与分子诊断前期研究的多样化需求；
在仪器适配方面，核心支持 3730/3730xl DNA Analyzer（3730XL 测序仪），同时兼容 SeqStudio™ Genetic Analyzer、SeqStudio™ Flex Series Genetic Analyzer、3500/3500xL Genetic Analyzer 等主流一代测序仪，适配仪器的电泳模块与 mobility 文件（如 3730XL 专用的 KB_3730_POP7_BDTv3.mob）与原赛默飞产品完全一致。
A4：需先通过公式计算缓冲液用量，再按比例配置体系，具体如下：
1. 稀释公式：缓冲液体积 = 0.5×(总反应体积 / 2.5) - GeticoDye Terminator Ready Reaction Mix（2.5X）体积；
（原理：Ready Reaction Mix 为 2.5X 浓度，需稀释至 1X，缓冲液为 5X 浓度，通过公式可精准控制终浓度）
2. 体系示例（20 μL 终体积 0.5X 反应）：
组分 | 体积 | 说明 |
无酶无 RNase 水 | 10 μL | 补足体积，需根据模板 / 引物实际体积调整 |
该 5X 测序缓冲液 | 2 μL | 按公式计算得出，确保终浓度适配 |
GeticoDye Terminator Ready Reaction Mix（2.5X） | 4 μL | 提供荧光终止子与 DNA 聚合酶 |
3.2 μM 引物 | 2 μL | 若用 0.8 pmol/μL 对照引物，需加 8 μL |
DNA 模板（如双链 DNA 150-300 ng/μL） | 2 μL | 按模板类型参考推荐用量 |
A5：需重点关注 4 点：
1. 解冻方式：从 4°C 取出后，置于室温或冰上自然解冻，禁止加热（如温水浴），否则会破坏缓冲液中的稳定成分，导致离子浓度异常；
2. 混匀与离心：解冻后需轻轻涡旋 2-3 秒（避免剧烈涡旋产生气泡），再短暂离心（2-3 秒，3000-5000 rpm），使管壁残留液体集中于管底，确保用量精准；
3. 避免反复冻融：缓冲液反复冻融会导致性能下降，建议按单次使用量（如 100 μL / 管）分装，分装后仍 4°C 保存，1 个月内用完；
4. 污染防控：使用无酶无 RNase 耗材，缓冲液管口禁止接触反应管、吸头或其他试剂，操作时戴手套并定期更换，防止核酸酶或杂质污染。
A6：必须纯化。测序反应后，体系中残留的未结合荧光终止子、盐类、多余引物等杂质会干扰毛细管电泳，导致峰形杂乱、信号噪声高，因此需通过纯化去除杂质；
推荐两种纯化方法：
1. BigDye XTerminator™ 纯化试剂盒：高效便捷，按 10 μL 纯化树脂 / 20 μL 反应液的比例加入，1400 rpm 振荡 30 分钟后离心，上清液直接上样，适合批量样品处理；
2. 乙醇 / EDTA 沉淀法：成本较低，向反应液中加 2 μL 3 M 乙酸钠（pH 5.2）+50 μL 冰乙醇，-20°C 静置 30 分钟后离心，70% 乙醇洗涤沉淀，晾干后用 Hi-Di™ 甲酰胺溶解，适合少量样品或预算有限的场景。
A7：主要有 3 类可能原因及对应解决方案：
1. 缓冲液用量错误：若未按公式计算，缓冲液用量不足会导致 Ready Reaction Mix 稀释不充分，信号生成减少；需重新核对公式，按总反应体积与 Ready Reaction Mix 体积精准计算缓冲液用量，重新配置体系；
2. 缓冲液反复冻融或过期：反复冻融会破坏缓冲液稳定性，过期会导致离子浓度失衡；需更换未反复冻融、在保质期内的缓冲液，且确保 4°C 储存条件合规；
3. 模板与缓冲液混合不均：缓冲液未充分混匀会导致局部反应环境异常；需在加入缓冲液后，轻轻涡旋 2-3 秒并短暂离心，确保各组分均匀接触。
A8：该问题与缓冲液适配的测序体系和聚合物类型相关，可通过 2 种方式优化：
1. 调整体系与聚合物：若当前使用 v3.1 体系 + POP-7™ 聚合物，可更换为 v1.1 体系 + POP-6™ 聚合物（该组合对 5' 端分辨率更高），缓冲液无需更换，仅需同步调整 3730XL 测序仪的 mobility 文件（如 KB_3730_POP6_BDTv1.mob）；
2. 优化热循环参数：适当降低退火温度（如从 50°C 降至 48°C），延长退火时间（从 5 秒增至 10 秒），确保引物与模板结合更稳定，减少 5' 端非特异性延伸产物，提升峰形清晰度。
A9：可能与缓冲液的 “局部污染” 或 “分装不均” 有关，可按以下步骤排查：
1. 检查缓冲液分装过程：若手动分装时，吸头接触过其他试剂或污染的耗材，会导致部分分装管污染，仅影响使用该分装管的样品；需更换未污染的分装管，或直接使用未分装的原瓶缓冲液重新实验；
2. 验证缓冲液活性：用 pREF-BDT™ 对照 DNA（200 ng/μL）配置对照反应，若对照样品测序有信号，说明缓冲液整体活性正常，无信号样品可能是局部操作污染；若对照也无信号，需检查原瓶缓冲液是否受核酸酶污染（可通过琼脂糖凝胶电泳检测缓冲液是否含核酸酶降解条带），并更换新批次缓冲液。
A10：储存条件与保质期需分情况注意：
1. 未开封产品：4°C 冷藏保存（禁止冷冻，0°C 以下会导致缓冲液结冰，解冻后离子浓度改变），未开封且储存合规时，保质期为产品标签所示的 18 个月；
2. 开封后产品：若未分装，需在 4°C 保存，且开封后 3 个月内用完；若按单次使用量分装（无酶无 RNase 离心管），分装后仍 4°C 保存，每管开封后需一次性用完，未开封的分装管保质期为 1 个月；
3. 储存禁忌：避免与含荧光染料的试剂（如 Ready Reaction Mix）长期共同暴露于强光环境，虽缓冲液本身无需避光，但强光可能通过试剂管间透射影响其他组分，间接干扰测序反应。
A11：该缓冲液仅用于科研用途，禁止用于临床诊断、人体样本检测（如疾病诊断、胎儿筛查等）或食品、药品质量检测等合规性要求严格的场景；
使用时需遵守 2 点合规要求：
1. 许可协议：产品受 “有限使用许可协议（Limited Use Label Licenses）” 约束，使用前需阅读并接受协议条款，禁止超出许可范围的商业使用或技术转让；
2. 废弃物处理：含该缓冲液的废弃反应液、耗材（吸头、离心管）需按实验室化学废弃物分类标准处置，不可随意排放或丢弃，避免环境污染；若涉及生物样本（如含病原体的 DNA 模板），需按生物安全等级要求进行高压灭菌后再处理。
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