GeticoScript III 逆转录酶

GeticoScript III 逆转录酶专为高效、精准地将 RNA 逆转录为 cDNA 而设计,广泛适用于多种实验场景。在基因表达分析实验中,如实时荧光定量 PCR(qPCR)、RNA 测序(RNA-Seq)等,需要先将 RNA 逆转录为 cDNA,以进一步对目标基因的表达水平进行定量检测。GeticoScript III 逆转录酶能够将细胞或组织中的总 RNA、poly (A)+ mRNA 或合成转录 RNA 等各类 RNA 模板高效转化为 cDNA,为后续的基因表达分析提供高质量的模板。在基因克隆实验中,获取目的基因的 cDNA 是关键步骤。通过使用 GeticoScript III 逆转录酶,可从含有目标基因 mRNA 的样本中合成 cDNA,再利用 PCR 等技术扩增目的基因片段,进而实现基因克隆。此外,在构建 cDNA 文库时,该逆转录酶也能发挥重要作用,帮助将复杂的 RNA 样本转化为 cDNA 文库,为筛选和研究特定基因提供基础。

2600
规格: 180101-10000U
数量:
库存:99999
GeticoScript III 逆转录酶产品介绍
在分子生物学研究领域,从 RNA 合成互补 DNA(cDNA)是众多实验的关键起始步骤,而逆转录酶在此过程中扮演着核心角色。GeticoScript III 逆转录酶作为一款前沿的分子生物学工具酶,凭借其卓越的性能,为科研工作者带来了全新的实验体验与更高的实验成功率。
一、产品用途
GeticoScript III 逆转录酶专为高效、精准地将 RNA 逆转录为 cDNA 而设计,广泛适用于多种实验场景。在基因表达分析实验中,如实时荧光定量 PCR(qPCR)、RNA 测序(RNA-Seq)等,需要先将 RNA 逆转录为 cDNA,以进一步对目标基因的表达水平进行定量检测。GeticoScript III 逆转录酶能够将细胞或组织中的总 RNA、poly (A)+ mRNA 或合成转录 RNA 等各类 RNA 模板高效转化为 cDNA,为后续的基因表达分析提供高质量的模板。在基因克隆实验中,获取目的基因的 cDNA 是关键步骤。通过使用 GeticoScript III 逆转录酶,可从含有目标基因 mRNA 的样本中合成 cDNA,再利用 PCR 等技术扩增目的基因片段,进而实现基因克隆。此外,在构建 cDNA 文库时,该逆转录酶也能发挥重要作用,帮助将复杂的 RNA 样本转化为 cDNA 文库,为筛选和研究特定基因提供基础。
二、产品特性 - 耐高温性能卓越
GeticoScript III 逆转录酶的突出特性在于其出色的耐高温能力。区别于传统逆转录酶,它能够在高达 65°C 的温度下进行反应,并且依然保持高活性。许多 RNA 分子,尤其是具有复杂二级结构的 RNA,在常规逆转录酶的适宜反应温度(如 37°C - 50°C)下,其二级结构难以完全打开,这会阻碍逆转录过程,导致 cDNA 合成效率低下或无法获得全长 cDNA。而 GeticoScript III 逆转录酶在高温环境下,能够有效克服 RNA 复杂二级结构的阻碍。高温使 RNA 分子的二级结构解开,为逆转录酶提供了更好的模板结合位点,从而显著提高了 cDNA 的合成效率与质量。例如,在对含有大量茎环结构、发夹结构等复杂二级结构的长链非编码 RNA(lncRNA)进行逆转录时,普通逆转录酶可能只能合成部分 cDNA 片段,而 GeticoScript III 逆转录酶在 65°C 反应条件下,能够顺利合成完整的 cDNA,为后续对 lncRNA 的功能研究奠定基础。
三、产品优势
  1. 高特异性:在高温反应条件下,GeticoScript III 逆转录酶能够精准识别并结合目标 RNA 模板,减少非特异性结合,从而有效降低非特异性 cDNA 合成,提高实验结果的准确性。这对于研究低丰度基因表达或在复杂样本中检测特定 RNA 时尤为重要,能够避免假阳性结果的干扰,使科研人员获得更可靠的数据。
  1. 高 cDNA 产量:凭借在高温下的持续高活性,GeticoScript III 逆转录酶能够将更多的 RNA 模板转化为 cDNA。即使在处理低含量 RNA 样本时,也能获得足够量的 cDNA 用于后续实验。例如,在微量细胞样本(如单细胞)或珍贵的临床样本中,RNA 含量极为有限,使用该逆转录酶可最大限度地提高 cDNA 产量,满足实验需求。
  1. 广泛的模板兼容性:对各类来源的 RNA 模板具有良好兼容性,无论是动物、植物、微生物还是病毒的 RNA,都能高效进行逆转录。这使得 GeticoScript III 逆转录酶在不同领域的科研工作中都能发挥重要作用,如在医学研究中对人类疾病相关基因的研究,农业领域对植物基因功能的探索,以及病毒学研究中对病毒 RNA 的分析等。
  1. 杂质耐受性强:在实际样本中,RNA 提取过程可能会残留一些杂质,如乙醇、异丙醇、酚类、胍盐、腐殖酸等,这些杂质往往会抑制传统逆转录酶的活性。GeticoScript III 逆转录酶对常见杂质具有较强的耐受性,即使样本中存在一定量的杂质,依然能够保持稳定的逆转录活性,保证实验的顺利进行,减少因样本杂质导致的实验失败风险。
  1. 操作便捷性:配套的反应缓冲液经过优化,与逆转录酶协同作用,简化了实验操作流程。科研人员只需按照试剂盒说明书进行操作,即可轻松完成逆转录反应,无需复杂的条件优化。同时,合成的 cDNA 产物可直接用于后续的 PCR、qPCR、克隆等实验,无需额外的纯化步骤,节省了实验时间与成本。
四、适用范围
GeticoScript III 逆转录酶适用于生物制药企业、科研院校、第三方检测机构等从事分子生物学研究的各类单位。无论是基础科研中对基因功能、基因调控机制的探索,还是应用研究中在疾病诊断、药物研发、生物制品开发等领域,该逆转录酶都能为相关实验提供可靠支持。在生物制药企业的新药研发过程中,用于分析药物靶点基因的表达情况;在科研院校的生命科学研究中,助力研究人员揭示生命过程中的分子机制;在第三方检测机构的基因检测服务中,为准确检测样本中的基因信息提供关键技术支持。
1. GeticoScript III 逆转录酶的储存条件是什么?
GeticoScript III 逆转录酶需储存在 - 20°C 的低温环境中,且应避免反复冻融。建议分装成小份(如每管 10μl 或 20μl)后储存,每次使用时取出一管,用完后剩余部分丢弃,以减少因反复冻融导致的酶活性下降。未开封的酶在 - 20°C 条件下可稳定保存 24 个月,开封后分装储存的酶建议在 3 个月内使用完毕。储存过程中需远离热源和强光,防止酶蛋白变性失活。
2. 该逆转录酶在 65°C 反应时,反应时间如何设置?
在 65°C 高温反应条件下,反应时间可根据 RNA 模板的长度和复杂度进行调整。对于长度小于 1kb 的 RNA 模板,通常设置 15 - 30 分钟即可完成高效逆转录;对于 1 - 5kb 的中长链 RNA,建议反应时间延长至 45 - 60 分钟;而对于大于 5kb 的长链 RNA 或具有复杂二级结构的 RNA(如 lncRNA、病毒基因组 RNA),可将反应时间设置为 60 - 90 分钟,以确保 cDNA 合成的完整性。反应结束后,需进行酶灭活处理(如 85°C 加热 5 分钟),终止逆转录反应,避免后续 PCR 中酶对反应体系的干扰。
3. 哪些因素可能影响 GeticoScript III 逆转录酶的活性?
  • RNA 模板质量:RNA 模板的完整性和纯度是关键因素。若 RNA 发生降解(如出现明显的降解条带),会导致 cDNA 合成效率降低;模板中残留的基因组 DNA、蛋白质、多糖等杂质,可能与酶结合或竞争结合位点,抑制酶活性。建议使用经琼脂糖凝胶电泳或 RNA 完整性检测(RIN 值>7)验证的高质量 RNA,并通过 DNase I 处理去除基因组 DNA 污染。
  • 反应体系成分:反应缓冲液的 pH 值和离子浓度需严格遵循说明书要求,偏离最佳范围(如 pH<7.0 或>9.0)会显著影响酶活性;Mg²⁺作为酶的辅因子,浓度过低会降低酶活性,过高则可能促进非特异性反应,建议按照试剂盒推荐浓度(通常 2 - 5mM)添加。
  • 抑制剂:RNA 提取过程中残留的胍盐、酚类、乙醇等物质,即使浓度较低也可能抑制酶活性。若样本中存在这些抑制剂,可通过乙醇沉淀法纯化 RNA(加入 3 倍体积无水乙醇和 0.1 倍体积 3M 醋酸钠,-20°C 静置 30 分钟后离心),或适当提高反应温度(如 60 - 65°C)减轻抑制作用。
4. 能否用该逆转录酶合成全长 cDNA?
可以。GeticoScript III 逆转录酶凭借耐高温特性,能有效解开 RNA 的复杂二级结构,尤其适合合成全长 cDNA。对于长度超过 5kb 的长链 RNA,建议采用以下优化方案:① 反应温度设置为 55 - 60°C(避免 65°C 高温对超长链 RNA 的潜在损伤);② 延长反应时间至 90 分钟;③ 在反应体系中加入适量的 RNase 抑制剂(如 40U),防止 RNA 降解;④ 使用 oligo (dT) 引物与随机引物混合(比例 1:1),提高长链 RNA 的覆盖度。实验证明,该酶对 3 - 10kb 的 RNA 模板,全长 cDNA 合成效率比传统逆转录酶高 30% 以上。
5. 该酶与其他逆转录酶相比,在非特异性反应控制方面有何优势?
在高温反应条件(如 55 - 65°C)下,GeticoScript III 逆转录酶的高特异性优势尤为明显。传统逆转录酶在低温(37 - 50°C)下易与 RNA 模板的非特异性位点结合,导致非特异性 cDNA 片段(如短于预期的条带)增多;而该酶在高温下通过提高对模板序列的识别特异性,减少与非目标序列的结合,同时高温环境可抑制引物二聚体的形成,降低非特异性扩增背景。例如,在检测低丰度基因(如表达量<10 copies/μl)时,非特异性产物占比可控制在 5% 以下,远低于传统酶(通常 15% - 20%)。
6. 如何验证 GeticoScript III 逆转录酶的逆转录效率?
  • cDNA 产量检测:通过紫外分光光度计测定 cDNA 的 OD260 值,计算产量(1 OD260 = 50ng/μl cDNA),优质 RNA 模板(1μg)经逆转录后,cDNA 产量应≥300ng。
  • qPCR 验证:选取不同表达丰度的内参基因(如 GAPDH、β-actin),以 cDNA 为模板进行 qPCR,若扩增曲线的 Ct 值标准差<1.0(3 次重复),且溶解曲线单一(无杂峰),说明逆转录效率稳定。
  • RNA-Seq 评估:对逆转录产物进行高通量测序,若测序数据中基因覆盖度>95%,且不同长度转录本的表达量与 RNA-Seq 原始数据一致性高(相关系数>0.9),则证明逆转录效率优异。
7. 反应体系中是否需要添加 RNase 抑制剂?
建议添加。虽然 GeticoScript III 逆转录酶本身对 RNase 有一定耐受性,但在逆转录反应中,RNA 模板可能被环境中的 RNase(如 RNase A)降解,尤其当反应时间较长(>60 分钟)或样本中 RNase 含量较高时(如血清、唾液样本),添加 RNase 抑制剂可显著提高 cDNA 合成的完整性。推荐使用试剂盒配套的 RNase 抑制剂(如 murine RNase Inhibitor),终浓度为 20 - 40U / 反应,与酶同时加入反应体系中,无需预处理。
8. 该酶能否用于单链环状 RNA(circRNA)的逆转录?
可以。circRNA 因无 poly (A) 尾且存在闭合环状结构,传统逆转录酶难以高效合成其 cDNA。GeticoScript III 逆转录酶可通过以下方式优化 circRNA 逆转录:① 使用随机六聚体引物(而非 oligo (dT)),确保引物与 circRNA 的环状区域结合;② 反应温度设置为 60 - 65°C,促进环状结构解开;③ 延长反应时间至 90 分钟,提高 cDNA 合成效率。实验表明,该酶对 circRNA 的逆转录效率比传统酶高 2 - 3 倍,可满足 circRNA 定量检测和测序分析的需求。

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