PurePlasmid 离子交换质粒大抽试剂盒

Pureplasmid™ HiPure 质粒过滤试剂盒采用创新的 HiPure 过滤柱技术,将纯化细菌裂解物过滤与质粒 DNA 阴离子交换树脂纯化巧妙整合在单个装置中。这一独特设计使得最终获得的质粒 DNA 质量达到了行业顶尖水平,其纯度可与经过两次氯化铯梯度纯化(这是 DNA 纯化领域最为严格的方法之一)的结果相媲美。对于转染及其他对 DNA 质量要求极高的应用场景,使用本试剂盒纯化的质粒 DNA 无需额外步骤去除 RNA、蛋白或内毒素等污染物,即可直接投入使用,大大节省了时间和精力,同时确保实验结果的准确性和可靠性。

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Pureplasmid™ HiPure 质粒过滤 Maxiprep 试剂盒


在分子生物学研究和生物技术应用中,获取高纯度的质粒 DNA 是众多实验成功的关键前提。Pureplasmid™ HiPure 质粒过滤 Maxiprep 试剂盒专为满足这一需求而精心设计,它能够从 100 - 500 mL 过夜细菌培养物中高效分离出高纯度的质粒 DNA,为您的科研和生产工作提供坚实保障。


一、产品核心优势


(一)超高纯度,媲美严苛标准


Pureplasmid™ HiPure 质粒过滤试剂盒采用创新的 HiPure 过滤柱技术,将纯化细菌裂解物过滤与质粒 DNA 阴离子交换树脂纯化巧妙整合在单个装置中。这一独特设计使得最终获得的质粒 DNA 质量达到了行业顶尖水平,其纯度可与经过两次氯化铯梯度纯化(这是 DNA 纯化领域最为严格的方法之一)的结果相媲美。对于转染及其他对 DNA 质量要求极高的应用场景,使用本试剂盒纯化的质粒 DNA 无需额外步骤去除 RNA、蛋白或内毒素等污染物,即可直接投入使用,大大节省了时间和精力,同时确保实验结果的准确性和可靠性。

(二)便捷高效,快速完成实验


  1. 简化流程,轻松操作:该试剂盒的操作方案极为简单,突破了传统方法中细菌裂解液澄清需依赖离心的繁琐步骤,让实验操作更加便捷。科研人员无需复杂的设备和操作技巧,即可轻松完成实验。

  2. 快速出结果,节省时间:在时间就是效率的科研领域,本试剂盒优势尽显。它能够在不到两小时的时间内完成质粒 DNA 的纯化工作,极大地缩短了实验周期,提高了工作效率,让您的科研进度更加顺畅。

(三)高产量,满足多样需求


无论是小规模的科研探索,还是大规模的生产制备,本试剂盒都能提供令人满意的产量。在中等规模制备时,产量可达 200 µg;大规模制备时,产量更是高达 850 µg,充分满足您在不同实验和生产阶段对质粒 DNA 的需求。

(四)性能可靠,广泛应用


Pureplasmid™ HiPure 质粒过滤试剂盒凭借其稳定可靠的性能,所纯化的高质量质粒 DNA 适用于多种应用场景,包括但不限于转染、基因克隆、测序分析、PCR 反应等。无论您的研究方向如何,它都能成为您得力的实验助手。

(五)安全环保,减少危害


本试剂盒在设计上充分考虑了实验人员的安全和环境保护。在整个操作方案中,去除了苯酚、氯仿、溴化乙锭和氯化铯等有害化学物质,有效减少了实验人员对这些有害物质的暴露和处理,让实验环境更加安全、环保。


二、工作原理


Pureplasmid™ HiPure 质粒试剂盒中的 HiPure 过滤柱是实现高效纯化的核心部件。在使用过程中,向试剂盒中加入 HiPure 过滤柱,无需离心即可快速澄清细菌裂解液(详细操作步骤及原理可参考随附的操作示意图)。裂解物滤芯巧妙地整合至 DNA 结合柱中,使得裂解物纯化和质粒 DNA 直接结合阴离子交换树脂这两个关键步骤得以合并,简化了操作流程。通过单次柱洗涤,能够有效去除 RNA、蛋白、代谢物和其他低分子量分子等杂质,确保质粒 DNA 的高纯度。随后,利用高盐缓冲液洗脱超纯质粒 DNA,再经过脱盐处理,并通过异丙醇沉淀步骤进行浓缩,最后通过离心收集,即可获得高纯度的质粒 DNA。整个操作方案在大约两小时内即可完成,操作简单、高效,为您带来卓越的实验体验。


选择 Pureplasmid™ HiPure 质粒过滤 Maxiprep 试剂盒,就是选择高效、精准、安全的质粒 DNA 纯化解决方案。


1. PurePlasmid 离子交换质粒大抽试剂盒适用于哪些菌株?
该试剂盒专为从大肠杆菌(E. coli)中提取质粒 DNA 而设计,对常见的实验室大肠杆菌菌株,如 DH5α、TOP10、BL21 (DE3) 等,均能实现高效提取 。这些菌株在基因克隆、蛋白表达等实验中广泛应用,试剂盒针对其细胞特性和质粒结构进行优化,可有效从相应的菌液中抽提高质量的质粒。对于其他非大肠杆菌菌株,由于细胞壁结构、细胞内成分及质粒特性等存在差异,试剂盒中的试剂和操作流程可能无法适配,难以保证理想的提取效果,不建议使用 。
2. 试剂盒的储存条件和保质期是怎样的?
试剂盒需存放在 2°C - 8°C 的环境中,注意避光保存 。在此适宜条件下,其保质期为 12 个月。切勿将试剂盒冷冻,低温冷冻可能引发试剂中的成分发生物理或化学变化,例如某些缓冲液中的盐类可能结晶析出,破坏试剂体系的稳定性,进而影响质粒提取的效率和质量 。若试剂盒曾被冷冻,即便后续恢复到合适温度,也不建议继续使用,应及时更换新的试剂盒,以确保实验结果的可靠性 。
3. 使用该试剂盒,推荐的菌液培养体积是多少?
建议使用 100 - 200 mL 处于对数生长期后期的大肠杆菌菌液 。处于对数生长期后期的细胞,质粒拷贝数较高,能保证最终获得较高产量的质粒 DNA 。若菌液体积过少,可能导致提取的质粒量不足,无法满足后续实验需求;而菌液体积过大,一方面可能增加细胞裂解不完全、杂质去除不彻底的风险,另一方面,试剂盒中的试剂用量是按照推荐菌液体积进行优化的,过多菌液可能使试剂相对不足,同样影响提取效果 。
4. 试剂盒中的试剂成分安全吗,操作时有哪些注意事项?
试剂盒中的试剂成分经过严格筛选和安全性评估,在正常操作情况下,对人体和环境相对安全 。但在操作过程中,仍需采取以下防护措施:
  • 必须佩戴合适的防护装备,如防护手套、护目镜和实验服,防止试剂与皮肤、眼睛直接接触 。一旦不慎接触,应立即用大量清水冲洗受接触部位,并根据实际情况及时就医 。
  • 操作需在通风良好的环境中进行。虽然试剂大多挥发性较低,但良好的通风条件能进一步降低潜在的吸入风险 。
  • 试剂盒仅用于科研实验,严禁用于临床诊断或其他人体相关应用 。
  • 使用完毕后,试剂盒中的废弃试剂和材料应依据当地的生物安全和化学废弃物处理规定妥善处置,不可随意丢弃,以免对环境造成污染 。
5. 试剂盒提取质粒 DNA 的原理是什么?
试剂盒采用离子交换色谱法进行质粒 DNA 的纯化 。其核心是利用一种专利的阴离子交换树脂,该树脂具有均匀孔径的小颗粒结构,且含有能与核酸磷酸基团结合的功能基团 。在提取过程中,细菌裂解后释放出的质粒 DNA,其带负电的磷酸基团会与树脂上带正电的功能基团发生特异性结合 。而细胞中的其他杂质,如蛋白质、RNA 等,由于与树脂的结合特性不同,在后续的洗涤步骤中可被有效去除 。最后,通过特定的洗脱缓冲液改变离子强度,使结合在树脂上的质粒 DNA 被洗脱下来,从而实现高纯度质粒 DNA 的提取 。
6. 试剂盒提取的质粒 DNA 纯度如何,能满足哪些实验需求?
经该试剂盒提取的质粒 DNA 纯度极高,A260/A280 比值通常大于 1.80,表明 DNA 中基本不含有可能干扰下游实验的蛋白质等杂质 。内毒素水平一般处于 0.1 - 1 EU/µg,这种低内毒素含量的质粒 DNA 非常适合用于对纯度要求苛刻的实验,如哺乳动物细胞转染、下一代测序、核酸标记、PCR、体外转录等 。对于一些对 DNA 质量要求极高的实验,如构建基因编辑载体用于细胞治疗研究等,该试剂盒提取的质粒 DNA 也能很好地满足需求,确保实验结果的准确性和可靠性 。
7. 提取过程中,有哪些关键步骤需要特别注意?
  • 细胞裂解:务必确保细胞充分裂解。加入裂解液后,轻柔颠倒混匀,避免剧烈振荡,防止基因组 DNA 断裂并混入质粒提取物中 。裂解时间也需严格控制,过长可能导致质粒 DNA 被降解,过短则细胞裂解不完全,影响质粒得率 。
  • 中和步骤:加入中和液后,要迅速轻柔混匀,使裂解反应及时终止 。中和不充分会影响后续离子交换树脂对质粒 DNA 的结合效率,导致质粒丢失 。
  • 洗涤步骤:按照说明书要求,用适量的洗涤缓冲液充分洗涤离子交换柱,以彻底去除残留的杂质 。洗涤不彻底会使最终提取的质粒 DNA 中含有较多杂质,影响纯度 。
  • 洗脱步骤:洗脱时,将洗脱缓冲液直接加在离子交换柱的膜中央,确保洗脱缓冲液与结合在膜上的质粒 DNA 充分接触,以提高洗脱效率 。洗脱缓冲液的体积和温度也会影响洗脱效果,建议按照说明书操作,若需提高洗脱效率,可适当增加洗脱缓冲液体积或预热洗脱缓冲液 。
8. 我按照操作步骤进行,提取的质粒 DNA 产量却很低,可能是什么原因?
  • 细胞生长状态不佳:若培养的大肠杆菌未处于对数生长期后期,细胞内质粒拷贝数较低,会导致最终提取的质粒 DNA 量少 。此外,菌液被杂菌污染,也可能影响目标菌株的生长和质粒复制 。
  • 操作失误:细胞裂解不充分,质粒未能完全释放;中和步骤操作不当,使体系酸碱度失衡影响质粒与树脂结合;洗涤过程中过度洗涤,导致已结合的质粒 DNA 被洗脱流失;洗脱时未充分接触或洗脱液用量过少,无法将质粒 DNA 完全洗脱下来等 。
  • 试剂问题:试剂盒存放条件不当,导致试剂失效。例如长时间高温存放,使缓冲液中的成分发生分解或变性 。或者试剂盒临近保质期,试剂活性有所下降 。
  • 质粒特性:某些特殊结构的质粒,如大分子量质粒、低拷贝数质粒,本身提取难度较大,产量相对较低 。若遇到这种情况,可尝试适当增加菌液量或采用针对特殊质粒的提取优化方案 。
9. 试剂盒中的试剂可以单独购买吗?
目前试剂盒中的试剂不支持单独购买 。这是因为试剂盒中的各种试剂,包括裂解液、中和液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液等,都是经过科学配比和优化组合的,各试剂之间协同作用,共同确保高效、高质量的质粒提取效果 。单独使用某一种试剂无法完成整个提取流程,且自行组合其他试剂,难以保证达到试剂盒的提取性能,甚至可能对质粒 DNA 造成不可逆的损伤,影响实验结果 。若试剂盒中的试剂有剩余或需要更多试剂进行实验,建议重新购买完整试剂盒 。
10. 该试剂盒与其他品牌的质粒大抽试剂盒相比,优势是什么?
  • 高纯度、高产量:通过优化的离子交换树脂和提取流程,能从 100 - 200 mL 菌液中获得 500 - 850 µg 的质粒 DNA,纯度可媲美两次氯化铯梯度离心的效果,且内毒素水平极低,为下游实验提供高质量的质粒 DNA 样本 。
  • 操作简便、省时:整个提取过程可在 2 小时内完成,无需进行额外的去除内毒素等繁琐步骤 。同时,操作步骤经过简化优化,无需复杂设备和特殊技术,普通实验室科研人员易于上手和掌握 。
  • 适用范围广:可用于纯化任何类型和大小的质粒 DNA,包括 BAC(细菌人工染色体)、Bacmid(杆粒)和 ssm13 DNA 等 。无论是常见的小分子量质粒,还是大分子量、结构复杂的质粒,都能实现高效提取 。
  • 绿色环保:与传统的氯化铯梯度离心法不同,该试剂盒不使用诸如溴化乙锭、氯化铯等有毒有害且难以处理的有机溶剂,减少了对实验人员的危害和对环境的污染 。


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