产品描述

一、产品性能概述

GeticoElectra DH10B T1 噬菌体抗性感受态细胞在分子生物学实验中展现出卓越的性能，其具备极高的转化效率，转化效率可超过 3 x 10¹⁰ cfu /μg 质粒 DNA。如此高的转化效率使其成为需要高效转化应用的理想之选，尤其在 cDNA 和 gDNA 文库构建等关键领域发挥着重要作用。在文库构建过程中，高效的转化效率能够确保更多的目标 DNA 片段被成功导入细胞，从而增加文库的完整性和代表性，为后续的基因研究和分析提供坚实的基础。

二、产品优势特点

（一）提高转化率

GeticoElectra DH10B - T1 细胞能够有效地提高有限克隆产物的转化率。在实际实验中，常常会遇到克隆产物数量有限的情况，而该细胞的高效转化能力可以充分利用这些有限的克隆产物，提高实验的成功率。

（二）克隆甲基化 DNA

该细胞允许有效克隆甲基化 DNA。DNA 甲基化是一种重要的表观遗传修饰，对基因表达和细胞功能具有重要影响。能够克隆甲基化 DNA 使得研究人员可以深入研究甲基化在基因调控中的作用，为表观遗传学研究提供了有力的工具。

（三）噬菌体抗性

GeticoElectra DH10B - T1 细胞对 T1 和 T5 噬菌体有抗性。在实验环境中，噬菌体污染是一个常见的问题，可能会影响实验结果的准确性和可靠性。这种抗性使得细胞在培养过程中能够抵御噬菌体的侵袭，保证实验的顺利进行。

（四）蓝 / 白筛选支持

该细胞在含有 X - Gal 或 Bluo - Gal 的平板上通过 α - 互补支持蓝 / 白筛选。蓝 / 白筛选是一种常用的分子生物学技术，用于区分含有重组质粒和非重组质粒的细胞。这一特性使得研究人员可以方便地筛选出含有目标 DNA 片段的克隆，提高实验效率。

（五）高产量质粒对照

GeticoElectra DH10B - T1 细胞能够提供用于下游应用的高产量质粒对照。高产量的质粒对照对于后续的实验操作，如基因测序、表达分析等非常重要，能够确保实验结果的准确性和可重复性。

订购信息

货号	规格	价格
180201	100ul * 5 支	3000.00 元

基因型

F - mcrA Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139Δ(ara, leu)7697 galU galK λ - rpsL nupG tonA

产品说明

一、转化方式限制

DH10B - T1 电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。这是由其细胞特性和制备工艺决定的，电击转化能够在瞬间产生高电压脉冲，使细胞膜形成短暂的孔洞，从而允许 DNA 分子进入细胞，而热激转化的条件不适合该细胞的转化需求。

二、菌株来源与特性

（一）来源

DH10B - T1 菌株来源于 MC1061 菌株，经过一系列的基因突变和改造，赋予了其独特的生物学特性。

（二）适合克隆富含甲基化 DNA

mcrA、mcrBC 及 mrr 突变使 DH10B 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA。无论是真核生物还是原核生物的基因组 DNA，都能被高效地转入 DH10B 中。这是因为这些基因突变消除了细胞内对甲基化 DNA 的限制修饰系统，使得甲基化 DNA 能够顺利进入细胞并进行复制。

（三）利于插入 DNA 稳定和质粒提取

recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。recA1 突变使细胞内的同源重组活性降低，减少了插入 DNA 发生重组和丢失的可能性，保证了插入 DNA 的稳定性。endA1 突变则消除了细胞内的核酸内切酶 I 的活性，避免了该酶对质粒 DNA 的降解，从而提高了质粒 DNA 的提取纯度。

（四）蓝白斑筛选与链霉素抗性

φ80dlacZ∆M15 标记的存在使 DH10B 可用于蓝白斑筛选。当含有重组质粒的细胞在含有 X - Gal 和 IPTG 的培养基上生长时，由于重组质粒中的插入片段破坏了 lacZ 基因的 α - 互补功能，细胞不能产生 β - 半乳糖苷酶，从而形成白色菌落；而含有非重组质粒的细胞则能产生 β - 半乳糖苷酶，使 X - Gal 水解产生蓝色产物，形成蓝色菌落。rpsL 赋予其链霉素抗性，这使得在培养过程中可以通过添加链霉素来筛选含有该菌株的细胞，提高筛选效率。

三、适用范围与转化效率

DH10B 感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建。经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率 > 10¹⁰ cfu/μg DNA。在大质粒构建和文库构建过程中，需要高效的转化效率来确保目标 DNA 片段的成功导入，而该细胞的高转化效率能够满足这些实验需求。

操作方法

一、电击杯预处理

将 2.5px 电击杯和杯盖从储存液中拿出，倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分。然后正置 5 分钟，使乙醇充分挥发。待乙醇挥发干净后，立即插入冰中，压实冰面，使电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。这一步骤的目的是去除电击杯表面的水分和乙醇，避免水分和乙醇对电击转化过程产生影响，同时使电击杯在低温环境下达到稳定的状态。

二、感受态细胞处理与 DNA 加入

取 - 80℃ 保存的 DH10B 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化。加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

（一）测定转化效率

若测定转化效率，使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19。对照质粒的使用可以帮助评估电击转化的效率，确保实验结果的准确性和可靠性。

（二）连接产物处理

对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 TE 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA) 重悬，DNA 浓度不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。乙醇沉淀可以去除连接产物中的杂质和盐分，提高 DNA 的纯度，从而提高转化效率。

三、混合物转移至电击杯

用 200 μl 枪头将感受态 - DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。气泡的存在会增加弧光放电的风险，影响电击转化的效果，因此在转移过程中要特别注意避免产生气泡。

四、电击转化操作

启动电转仪，设置参数：C = 25 μF，PC = 200 Ω，V = 1.8 kV（此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作）。将电击杯快速放入电转槽中，电击完成后快速插入冰中。合适的电转参数是确保电击转化成功的关键，不同的电转仪可能需要不同的参数设置，因此要根据所用电转仪的推荐参数进行操作。

五、细胞复苏

2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。细胞复苏过程可以使电击处理后的细胞恢复正常的生理状态，提高细胞的存活率和转化效率。

六、涂板培养

5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100 - 200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径 375px 培养皿 2 - 5 个）。将平板倒置放于 37℃ 培养箱过夜培养 13 - 17 小时。涂板培养可以使转化后的细胞在含有抗生素的培养基上生长，筛选出含有目标 DNA 片段的克隆。

注意事项

一、DNA 加入体积限制

加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。过大的 DNA 加入体积可能会影响感受态细胞的生理状态和转化效率，因此要严格控制 DNA 的加入体积。

二、避免气泡产生

电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。弧光放电会导致电击转化过程中产生过高的温度和能量，可能会损伤细胞和 DNA，从而降低转化效率。

三、DNA 纯度要求

当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。因此，在进行电击转化前，要确保 DNA 的纯度，避免杂质对转化效率的影响。

四、电击杯离子影响

电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。在使用电击杯前，要确保其清洗干净，避免残留的离子对电击转化过程产生影响。

五、质粒提取与转化效率

若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。大质粒的转化难度相对较大，使用高纯质粒提取试剂盒可以提高质粒的纯度，从而提高转化效率。

六、连接产物处理

对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA) 重悬产物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。乙醇沉淀可以去除连接产物中的杂质和盐分，提高 DNA 的纯度，从而提高转化效率。

七、操作轻柔

混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 15px) 避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。轻柔的操作可以避免对感受态细胞的损伤，保证细胞的完整性和活性，从而提高转化效率。

八、细胞保存条件

电击感受态细胞最好保存在 - 80℃ 以下，高于 - 80℃ 超期储存会导致转化效率会下降。低温保存可以保持感受态细胞的活性和稳定性，延长其保质期，确保在使用时能够获得较高的转化效率。

GeneticElectra DH10B T1抗噬菌体电转化感受态细胞