在现代生物学研究中，将外源性 DNA 引入单细胞绿藻 —— 莱茵衣藻，是探索基因功能、开展遗传工程研究的重要手段。然而，这一过程面临着巨大的挑战。莱茵衣藻具有刚性细胞壁，这一结构如同坚固的防线，阻碍了外源性 DNA 的进入，常常导致转化实验失败或转化效率极低。为了克服这一障碍，科研人员尝试了多种方法，如玻璃珠搅拌法、电穿孔法和微粒轰击法等。玻璃珠搅拌法是通过玻璃珠的机械搅拌作用，使细胞壁产生微小的破损，从而让外源性 DNA 有机会进入细胞；电穿孔法则是利用短暂的高电压脉冲，在细胞膜上形成瞬间的小孔，使 DNA 能够进入细胞内部；微粒轰击法是将 DNA 包裹在微小的金属颗粒表面，然后利用高压将这些颗粒轰击到细胞中。但遗憾的是，这些传统方法的转化效率都非常不理想，难以满足科研工作的需求。
订购信息
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格 |
| 180701 | Plus Trans藻类转化试剂 | 250ml | 1650.00 |
从冷冻状态中复活 1 瓶莱茵衣藻细胞，将其接种到 200 mL 的 TAP 培养基中。TAP 培养基为莱茵衣藻的生长提供了必要的营养物质。在标准培养条件下（如适宜的光照、温度和气体环境）培养细胞，并持续监测细胞浓度，这一过程持续 3 天。细胞浓度的监测对于后续实验的成功至关重要，因为不同生长阶段的细胞对转化操作的响应可能不同。
当细胞浓度达到 1×10⁶ - 2×10⁶ 个细胞 /mL 时，此时细胞处于早期对数阶段，是进行转化操作的理想状态。将培养物以 2500 rpm 的转速离心 5 分钟，使细胞沉淀下来。小心弃去上清液，并尽可能完全地除去残留的液体，以避免杂质对后续实验的干扰。需要注意的是，如果细胞浓度略低于 1×10⁶ 个细胞 /mL，仍然可以进行细胞收获操作，一般不会对转化效率产生显著影响，但细胞的活力和状态应尽量保持良好。
将细胞沉淀重悬于 10 mL Plus - Trans 转化试剂中，这一步骤可以使细胞与转化试剂充分接触，为后续的转化过程做好准备。然后以 2500 rpm 的转速离心 5 分钟，再次沉淀细胞。弃去上清液，并仔细除去所有残留液体。重复这一清洗步骤，即再次将沉淀重悬于 10 mL Plus - Trans 转化试剂中，以 2500 rpm 离心 5 分钟，进一步确保细胞表面的杂质被去除。
将经过清洗的细胞重悬于 Plus - Trans 转化试剂中，调整细胞浓度至终浓度为 2×10⁸ - 3×10⁸ 个细胞 /mL。合适的细胞浓度对于提高转化效率至关重要，过高或过低的细胞浓度都可能影响 DNA 与细胞的相互作用。
每 250 μL 细胞悬液中加入 2 - 4 μg 线性化 DNA，然后将混合物在 4°C 下孵育 5 分钟。低温孵育可以使 DNA 与细胞表面的受体更好地结合，同时减少核酸酶对 DNA 的降解作用。
在 BioRad® Gene Pulser® II 电穿孔仪上设置特定的电穿孔参数：电压为 500V，电容为 50 μF，电阻为 800Ω。这些参数是经过优化的，能够在保证细胞存活的前提下，使细胞膜形成合适大小的穿孔，便于 DNA 进入细胞。
在进行电穿孔之前，将 250 μL 细胞 - DNA 混合物转移到预先在冰上放置的冰冷比色皿中。低温环境可以保持细胞的活性和 DNA 的稳定性。
使用设置好的参数对细胞进行电穿孔。通常情况下，电脉冲持续时间约为 30 毫秒。在电脉冲的作用下，细胞膜会形成瞬间的小孔，使 DNA 能够进入细胞内部。
电穿孔完成后，让细胞在冰上放置 15 分钟。这一过程有助于细胞膜的修复，减少细胞损伤，提高细胞的存活率。
在室温下，将细胞转移到含有 10 mL TAP - 40 mM 蔗糖溶液的 50 mL 锥形管或烧瓶中。蔗糖溶液可以提供一定的渗透压保护，防止细胞因渗透压变化而受损。然后将细胞放入藻室中孵育 14 - 16 小时，让细胞在适宜的环境中恢复和表达外源基因。
将孵育后的细胞以 2500 rpm 的转速离心 5 分钟，收集细胞沉淀。弃去上清液，并将沉淀重悬于 200 μL TAP 培养基中。
主要适用于单细胞绿藻莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii），包括野生型及多种突变型菌株，如 CC1690、CC2935、CC1009 等。对于其他藻类，目前缺乏足够实验数据支持，不建议使用 。
2. 试剂的储存条件和保质期是怎样的？
需储存于 2°C 至 8°C 环境，保质期为 6 个月。避免冷冻，以防影响试剂活性 。
3. 使用该试剂转化莱茵衣藻，推荐的细胞浓度是多少？
进行转化时，建议将莱茵衣藻细胞重悬于试剂中，终浓度为 2×10⁸–3×10⁸个细胞 /mL 。
4. 转化时对 DNA 有什么要求？
5. 我按照步骤操作，转化效率却很低，可能是什么原因？
6. 转化成功后，如何筛选出阳性克隆？
质粒 DNA 是随机插入基因组的。可首先通过菌落 PCR 筛选菌落，确保启动子和目的基因完全整合，然后进一步筛选几个阳性克隆，检测目的基因的表达情况，从而挑选出表达量最高的克隆 。
7. 转化过程中，培养藻类细胞有什么注意事项？
8. Plus Trans 藻类转化试剂的作用原理是什么？
在电穿孔过程中，该试剂可提高莱茵衣藻细胞壁的通透性，促进 DNA 进入细胞内部，相比传统电穿孔方法，可将转化效率提高 2 到 3 个数量级 。
9. 该试剂可以单独使用进行转化吗？
不可以，它需要配合电穿孔等方法使用，不能单独实现藻类转化 。
10. 实验操作过程中有哪些安全注意事项？
使用前必须阅读安全数据表（SDS）并严格遵循操作说明。操作时需穿戴适当的防护眼镜、实验衣物和手套。本产品仅限研究使用，不可用于诊断程序 。
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