Gquant RNA XR Assay Kit

在分子生物学研究中,准确测定高丰度 RNA 样品的含量至关重要。Gquant RNA XR 定量试剂盒与 Qubit 荧光计联合使用,为高丰度 RNA 样品的定量提供了一种精准且具选择性的解决方案。这种搭配凭借先进的技术和优化的试剂配方,能够满足科研人员对高丰度 RNA 定量的严格需求。

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产品名称产品编号规格价格(元)
Gquant RNA XR Assay Kit121501100 次(可进行 250 次检测反应)1000.00
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Gquant RNA XR Assay Kit1215031000 次(可进行 2500 次检测反应)4800.00


产品描述


一、总体功能概述


在分子生物学研究中,准确测定高丰度 RNA 样品的含量至关重要。Gquant RNA XR 定量试剂盒与 Qubit 荧光计联合使用,为高丰度 RNA 样品的定量提供了一种精准且具选择性的解决方案。这种搭配凭借先进的技术和优化的试剂配方,能够满足科研人员对高丰度 RNA 定量的严格需求。


二、检测特异性


该测定方法对 RNA 展现出极高的选择性。在复杂的生物样品中,往往同时存在 DNA、蛋白质以及游离核苷酸等多种生物分子。然而,Gquant RNA XR 定量试剂盒能够精准地识别并定量 RNA,而对 DNA、蛋白质或游离核苷酸不产生响应。这种高度的特异性确保了检测结果仅反映 RNA 的真实含量,避免了其他生物分子的干扰,为后续的实验分析提供了可靠的数据基础。


三、抗干扰能力


在实际的实验操作中,生物样品常常会受到各种污染物的影响,如盐、游离核苷酸、溶剂、去污剂或蛋白质等。但 Gquant RNA XR 定量试剂盒对这些常见污染物具有良好的耐受性。即使样品中存在一定量的上述污染物,该试剂盒依然能够准确地测定 RNA 的含量,保证了检测结果的稳定性和可靠性。这一特性使得该试剂盒在处理各种复杂来源的生物样品时具有广泛的适用性。


四、适用浓度范围


Gquant RNA XR 定量试剂盒经过精心设计,适用于 RNA 样品浓度在 100 ng/μL 至 20 μg/μL 之间的定量检测。这一较宽的浓度范围涵盖了大多数高丰度 RNA 样品的实际浓度区间,能够满足不同实验场景下的检测需求。无论是在基因表达分析、转录组测序等基础研究中,还是在生物制药、临床诊断等应用领域,该试剂盒都能发挥其优势,为科研和生产提供准确的 RNA 定量数据。


五、操作便捷性


该试剂盒为用户提供了浓缩的分析试剂、稀释缓冲液以及预稀释的 RNA 标准品。整个操作过程简便易行,用户只需使用提供的缓冲液对试剂进行稀释,然后添加 1 μL 至 20 μL 之间任意体积的样品,最后使用 Qubit 荧光计即可读取 RNA 浓度。这种简单直观的操作流程大大节省了实验时间和人力成本,提高了实验效率。


1. Gquant RNA XR Qubit Assay Kit 适用于哪些样本类型?
该试剂盒适用于多种富含 RNA 的样本类型。在动物研究领域,常见的动物组织样本,如小鼠的肝脏、肾脏、大脑组织,以及大鼠的心肌、骨骼肌组织等,均可使用本试剂盒进行 RNA 定量分析。这些组织中的 RNA 在经过适当提取后,通过 Gquant RNA XR Qubit Assay Kit 能够准确测定其含量 。对于植物样本,像拟南芥的叶片、根部,以及水稻的幼穗、茎秆等组织的 RNA,也能很好地适用 。在细胞生物学研究中,无论是原代培养的细胞,还是各种细胞系,例如 HEK293 细胞(人胚胎肾细胞)、HeLa 细胞(人宫颈癌细胞)等,只要成功提取出 RNA,该试剂盒都能精准量化 RNA 的浓度 。此外,血液样本经过特殊处理分离出 RNA 后,同样可借助本试剂盒完成 RNA 定量工作 。不过,需要注意的是,样本中的 RNA 应尽量保持完整,避免过度降解,否则可能影响定量结果的准确性 。若样本本身存在 RNA 酶污染,或者在样本采集、运输及保存过程中操作不当,导致 RNA 降解严重,可能无法通过该试剂盒获得理想的定量数据 。
2. 试剂盒的储存条件和保质期是怎样的?
试剂盒中的各组分应储存于2-8°C 环境 。其中,核心的荧光染料试剂对温度和光照较为敏感,低温储存能够有效维持其化学稳定性,防止荧光淬灭以及成分分解 。长期处于高温环境(如高于 25°C),可能使荧光染料的结构发生变化,降低其与 RNA 结合的特异性和亲和力,进而影响定量结果的准确性 。同时,应避免试剂盒受到光照,尤其是强光直射,因为光照可能加速荧光染料的光化学反应,导致其性能下降 。在严格按照推荐条件储存的情况下,试剂盒的保质期通常为 12 个月 。超过保质期后,试剂盒中的部分试剂可能会失效,如标准品的浓度准确性可能出现偏差,荧光染料与 RNA 的结合能力也可能减弱,这会使得定量结果不可靠,所以不建议使用过期试剂盒进行实验 。每次使用试剂盒后,需及时放回 2-8°C 冰箱,并确保冰箱温度稳定,避免频繁开关冰箱门导致温度波动过大,影响试剂盒的保存效果 。
3. 使用该试剂盒进行 RNA 定量,具体操作步骤是怎样的?
  • 准备工作:从冰箱中取出试剂盒,将所需试剂平衡至室温 。准备干净的 0.5 ml 薄壁 PCR 管(适用于 Qubit 4 荧光计)或 8 联管(适用于 Qubit flex 荧光计),并标记好样本管和标准品管 。同时,确保 Qubit 荧光计已开启并预热稳定,选择正确的 RNA XR 检测程序 。
  • 标准品制备:试剂盒内通常提供了一系列不同浓度的 RNA 标准品母液 。按照 1:200 的比例,使用试剂盒中的稀释缓冲液将荧光染料试剂稀释成工作液 。在标准品管中,分别加入 10 μl 不同浓度的 RNA 标准品母液,再加入 190 μl 上述制备好的工作液,轻轻涡旋振荡混合均匀 。标准品的浓度梯度一般覆盖了该试剂盒的有效检测范围,如 5 - 20,000 ng/μl 。
  • 样本处理:对于提取好的 RNA 样本,根据预估浓度,取适量体积(1 - 20 μl 均可)加入到装有 190 μl 工作液的样本管中,同样涡旋振荡使样本与工作液充分混匀 。若样本 RNA 浓度过高,可能超出试剂盒的检测范围,此时需对样本进行适当稀释后再进行后续操作;若浓度过低,可尝试增加样本的上样体积,但最大不超过 20 μl 。
  • 上机检测:将混合均匀的标准品管和样本管依次放入 Qubit 荧光计中,关闭仪器盖子 。启动检测程序,仪器会自动读取标准品的荧光信号并生成标准曲线,随后根据标准曲线计算出样本中 RNA 的浓度 。检测过程中,应避免晃动仪器,确保检测环境稳定,以获得准确可靠的结果 。
  • 结果记录与分析:检测完成后,从 Qubit 荧光计中导出数据,记录每个样本的 RNA 浓度值 。对数据进行分析时,需注意检查标准曲线的线性关系,R² 值应接近 1,表明标准曲线质量良好,基于此得出的样本 RNA 浓度较为可靠 。若发现标准曲线异常,应排查原因,如标准品制备是否准确、工作液是否配制正确等,必要时重新进行标准品制备和检测流程 。
4. 试剂盒中的试剂成分安全吗,操作时有哪些注意事项?
试剂盒中的试剂成分相对安全,不含有常见的强毒性、强腐蚀性物质 。但操作过程中仍需采取必要的防护措施 。操作人员应佩戴一次性手套,防止试剂与皮肤直接接触,若不慎接触到皮肤,应立即用大量清水冲洗接触部位 15 分钟以上,若出现不适症状,及时就医 。同时,需佩戴护目镜,避免试剂溅入眼睛,一旦试剂入眼,应迅速用大量清水冲洗,并尽快前往医院进行处理 。操作应在通风良好的实验环境中进行,避免吸入试剂挥发的气体 。尽管试剂挥发性相对较低,但长时间处于高浓度试剂蒸汽环境中,可能对呼吸道产生刺激 。不同样本在使用试剂进行处理时,要使用专用的移液器和吸头,防止样本间交叉污染 。例如,在处理动物组织样本和植物组织样本时,若共用同一移液器且未彻底清洗,可能导致样本间 RNA 的交叉污染,影响实验结果的准确性 。使用完毕后,试剂盒中的剩余试剂应及时放回 - 20°C 冰箱保存,防止试剂在常温下长时间放置而失效 。对于含有试剂的废弃液体和样本,应按照当地实验室废弃物处理规定进行妥善处置,不可随意丢弃,以免对环境造成污染 。特别是含有生物样本的废弃物,可能携带潜在的生物危害,需进行无害化处理 。
5. 该试剂盒定量 RNA 的原理是什么?
Gquant RNA XR Qubit Assay Kit 主要基于荧光染料与 RNA 特异性结合的原理来实现 RNA 定量 。试剂盒中的荧光染料能够选择性地与 RNA 分子结合,当荧光染料与 RNA 结合后,在特定波长的光激发下会发出荧光信号 。该荧光染料对 RNA 具有高度特异性,相较于 DNA、蛋白质以及游离核苷酸等物质,它优先且更紧密地与 RNA 结合 。在一定范围内,荧光信号的强度与结合的 RNA 量成正比 。通过使用试剂盒提供的一系列已知浓度的 RNA 标准品,与荧光染料工作液混合后,在 Qubit 荧光计中检测其荧光强度,从而绘制出标准曲线 。该标准曲线反映了荧光强度与 RNA 浓度之间的线性关系 。对于未知浓度的 RNA 样本,在相同条件下与荧光染料工作液混合并检测荧光强度,根据测得的荧光强度值,通过标准曲线即可计算出样本中 RNA 的浓度 。这种基于荧光检测的方法具有高灵敏度和高选择性,能够有效区分 RNA 与其他生物分子,即使在样本中存在一定量的杂质(如少量的盐类、有机溶剂、去污剂等)时,也能较为准确地对 RNA 进行定量 。同时,该方法能够检测到低丰度和高丰度的 RNA 样本,适用范围广泛,为 RNA 相关的研究工作提供了可靠的定量手段 。
6. 试剂盒的定量准确性如何,受哪些因素影响?
  • 定量准确性:Gquant RNA XR Qubit Assay Kit 具有较高的定量准确性 。在理想实验条件下,对于浓度在 5 - 20,000 ng/μl 范围内的 RNA 样本,其定量结果的误差通常可控制在较小范围内 。通过对大量已知浓度 RNA 样本的检测验证,结果显示该试剂盒的测量值与样本实际浓度具有良好的一致性,相关系数 R² 通常能达到 0.99 以上 。在 RNA 测序(RNA - Seq)实验的样本定量环节,使用该试剂盒准确定量 RNA 浓度,能够为后续的文库构建和测序提供可靠的起始材料浓度信息,保证测序结果的准确性和重复性 。
  • 影响因素
  • 样本质量:样本中的 RNA 完整性至关重要 。若 RNA 发生降解,形成小片段 RNA,可能导致荧光染料结合情况改变,使定量结果不准确 。如植物样本在采集后若未及时妥善保存,受到自身 RNA 酶的作用,RNA 降解,此时使用该试剂盒定量,可能低估样本中完整 RNA 的实际含量 。
  • 操作误差:在标准品制备过程中,若移液器操作不准确,导致标准品浓度不准确,会直接影响标准曲线的准确性,进而影响样本定量结果 。例如,移取标准品母液时少取或多取,会使标准品实际浓度偏离预期,最终导致样本 RNA 浓度计算错误 。样本与荧光染料工作液混合不均匀,也可能造成局部荧光信号异常,影响定量准确性 。
  • 仪器状态:Qubit 荧光计若未进行定期校准,其光源强度、检测器灵敏度等可能发生变化,导致检测的荧光强度不准确 。仪器内部若有灰尘等杂质污染光路系统,也会干扰荧光信号的检测,影响定量结果 。
  • 试剂因素:试剂盒中的试剂若储存不当,如荧光染料试剂受到光照、温度波动影响而变质,或者稀释缓冲液被污染,都可能改变试剂与 RNA 的结合特性,降低定量准确性 。过期的试剂,其性能下降,也无法保证准确的定量效果 。
7. 按照操作步骤使用试剂盒,却得到异常的定量结果,可能是什么原因?
  • 样本相关原因
  • 样本降解:如前文所述,样本在采集、运输或储存过程中可能发生 RNA 降解 。像血液样本若未及时分离血浆并保存 RNA,血细胞中的 RNA 酶会逐渐降解 RNA 。降解后的 RNA 片段大小不一,与荧光染料的结合情况改变,可能导致定量结果偏低或波动较大 。可通过琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 的完整性,若出现 18S 和 28S rRNA 条带模糊、亮度降低或出现弥散条带,表明 RNA 已降解 。
  • 样本杂质污染:样本中若含有过多的蛋白质、多糖、酚类等杂质,可能干扰荧光染料与 RNA 的结合 。植物组织样本中常含有多糖,若提取 RNA 时未有效去除多糖,多糖会与 RNA 共沉淀,在定量时多糖可能与荧光染料发生非特异性结合,导致荧光信号异常,使定量结果偏高 。可通过测定样本在 260 nm、280 nm 和 230 nm 处的吸光度,评估样本的纯度,A260/A280 应在 1.8 - 2.0 之间,A260/A230 应大于 2.0,若比值偏离该范围,提示样本可能存在杂质污染 。
  • 操作相关原因
  • 移液器不准确:移液器长时间使用未校准,或者在吸取试剂过程中操作不当(如吸头未紧密安装、吸取时过快过猛),会导致移液体积不准确 。在制备标准品时,移液误差会使标准品浓度不准确,影响标准曲线绘制;在处理样本时,移液误差会导致样本与荧光染料工作液的比例失调,进而影响定量结果 。可使用高精度电子天平对移液器进行校准,通过称量移取的纯水重量,根据水的密度计算实际移液体积,与设定体积进行比对 。
  • 混合不充分:标准品或样本与荧光染料工作液混合时,若涡旋振荡时间过短或力度不够,会导致混合不均匀 。局部 RNA 与荧光染料未充分结合,使检测的荧光强度不能真实反映样本中 RNA 的含量 。对于较难混合均匀的样本(如高浓度的 RNA 样本或含有较多颗粒物质的样本),可适当延长涡旋振荡时间,或者采用多次吹打的方式辅助混合 。
  • 检测过程异常:在将样本管放入 Qubit 荧光计时,若盖子未完全关闭,会导致光线泄漏,干扰荧光信号检测 。样本管在仪器中放置位置不正确,也可能使检测结果异常 。检测过程中若频繁开关仪器盖子,或者周围环境存在强电磁干扰,同样会影响荧光计的检测稳定性 。
  • 试剂相关原因
  • 试剂失效:试剂盒中的试剂超过保质期,或者储存条件不当(如温度过高、光照),会使试剂性能下降 。荧光染料试剂失效后,可能无法与 RNA 正常结合,或者结合后的荧光特性改变,导致定量结果不准确 。可使用已知浓度的 RNA 标准品对试剂进行验证,若标准品检测结果偏差较大,提示试剂可能失效 。
  • 试剂污染:稀释缓冲液或荧光染料试剂在使用过程中被其他物质污染,如操作时使用了不干净的移液器或容器,会改变试剂的化学性质,影响其与 RNA 的结合和荧光信号的产生 。一旦发现试剂有污染迹象(如颜色变化、出现沉淀等),应立即停止使用 。
8. 该试剂盒可以和其他品牌的 RNA 提取试剂盒搭配使用吗?
Gquant RNA XR Qubit Assay Kit 具有较好的兼容性,可以和大多数其他品牌的 RNA 提取试剂盒搭配使用 。RNA 提取试剂盒的主要作用是从样本中分离出 RNA,而 Gquant RNA XR Qubit Assay Kit 负责对提取出的 RNA 进行定量 。不同品牌的 RNA 提取试剂盒,其提取原理和方法可能有所差异,但只要能成功提取出质量较好的 RNA,理论上都能使用本试剂盒进行定量 。例如,一些基于硅胶柱吸附原理的 RNA 提取试剂盒,能够高效地从细胞或组织样本中纯化出 RNA,将这些提取的 RNA 用于 Gquant RNA XR Qubit Assay Kit 进行定量分析,通常能得到准确的结果 。然而,由于不同 RNA 提取试剂盒在裂解液成分、洗脱条件等方面存在差异,可能会导致提取的 RNA 中残留一些杂质,如盐类、有机溶剂等 。这些杂质在一定程度上可能会影响 Gquant RNA XR Qubit Assay Kit 的定量准确性 。因此,在首次将本试剂盒与新的 RNA 提取试剂盒搭配使用时,建议先对提取的 RNA 进行纯度检测,如通过测定 A260/A280 和 A260/A230 比值评估杂质情况 。若发现 RNA 纯度不佳,可对提取的 RNA 进行进一步纯化,如使用乙醇沉淀等方法去除杂质后,再进行定量检测,以确保获得可靠的定量结果 。
9. 与其他品牌的 RNA 定量试剂盒相比,Gquant RNA XR Qubit Assay Kit 的优势是什么?
  • 宽动态检测范围:该试剂盒能够准确测定浓度在 5 - 20,000 ng/μl 范围内的 RNA 样本,涵盖了从低丰度到高丰度的 RNA,相比部分其他品牌试剂盒检测范围更宽 。在一些需要同时检测不同表达水平 RNA 的实验中,如研究肿瘤组织中某些基因的差异表达,既有高表达的看家基因 RNA,又有低表达的肿瘤相关基因 RNA,使用 Gquant RNA XR Qubit Assay Kit 可在同一体系内准确完成定量,无需对样本进行多次稀释或更换不同检测试剂盒,节省时间和样本量 。
  • 高灵敏度和特异性:试剂盒中的荧光染料对 RNA 具有高度特异性,能有效区分 RNA 与 DNA、蛋白质及游离核苷酸等物质,减少杂质干扰 。其灵敏度高,可检测到低含量的 RNA,对于珍贵样本或 RNA 含量较低的样本(如微量的细胞样本或某些珍稀生物组织样本)的定量分析具有明显优势 。在检测过程中,即使样本中存在少量杂质,也能准确测量 RNA 浓度,保证实验结果的可靠性 。
  • 操作简便快速:操作流程相对简单,只需将标准品和样本与荧光染料工作液按比例混合,涡旋振荡后即可上机检测 。整个操作过程无需复杂的预处理步骤或特殊设备,实验人员能够快速上手 。与一些需要繁琐的样本处理步骤或使用复杂仪器的定量试剂盒相比,大大节省了实验时间和人力成本,提高了实验效率 。
  • 良好的兼容性:如前文所述,能与多种不同品牌的 RNA 提取试剂盒搭配使用,为实验人员提供了更多选择 。实验人员可根据自身样本特点和实验习惯,选择合适的 RNA 提取方法,再使用本试剂盒进行定量,增加了实验方案的灵活性 。而部分其他品牌定量试剂盒可能与特定 RNA 提取试剂盒配套使用效果最佳,兼容性较差 。
  • 可靠的定量准确性:在严格按照操作步骤进行实验的情况下,该试剂盒的定量准确性高,误差小 。其标准曲线的线性关系良好,相关系数 R² 通常能达到 0.99 以上,基于此计算出的样本 RNA 浓度可靠性强 。在对大量样本进行 RNA 定量分析时,能够提供稳定、准确的数据,为后续的实验研究奠定坚实基础 。
10. 试剂盒中的标准品如何正确使用和保存?
  • 正确使用:标准品是用于绘制标准曲线的关键试剂,使用时需严格按照操作步骤进行 。首先,从冰箱中取出标准品后,应在室温下平衡 15 - 30 分钟,使标准品温度与室温一致,避免因温度差异导致移液不准确 。在移取标准品时,使用经过校准的高精度移液器,确保移取体积的准确性 。一般按照试剂盒说明书要求,取 10 μl 不同浓度的标准品母液加入到 190 μl 荧光染料工作液中,轻轻涡旋振荡混合均匀 。混合后的标准品溶液应尽快用于上机检测,避免长时间放置导致荧光信号变化 。在检测过程中,将标准品管依次放入 Qubit 荧光计时,要确保放置位置正确,盖子完全关闭,以保证荧光信号检测的准确性 。


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