EasyStyle Plus 293 表达系统试剂盒产品介绍
一、产品概述
EasyStyle Plus 293 表达系统试剂盒专为科研工作者设计，用于在 293 人胚肾细胞中进行高效的蛋白表达。该试剂盒基于悬浮适应的细胞系，配合优化的培养基与转染试剂，可助力科研人员快速、稳定地获取高产量的重组蛋白，满足从基础研究到工艺开发等多方面需求。
二、产品组成
- EasyStyle™ 293 - F 细胞：试剂盒中每管含有 1×10⁷个细胞，冻存于 90% EasyStyle™ 293 表达培养基和 10% DMSO 中，需存放于液氮。细胞源自人胚肾 293 细胞系，经特殊驯化适应在 EasyStyle™ 293 表达培养基中进行高密度、无血清悬浮培养，具有生长迅速、蛋白表达能力强等特性。
- EasyStyle™ 293 表达培养基：1L 装，4℃避光保存。这是一款无血清、化学成分确定的培养基，添加了谷氨酰胺补充剂，无需额外添加其他成分。培养基专为 293 - F 细胞的高密度悬浮培养及转染过程优化，可支持细胞在生物反应器或摇瓶中大规模培养，为细胞生长和蛋白表达提供稳定且适宜的环境。
- EasyStyle™ PLUS 试剂：1mL，4℃保存，不可冷冻。该试剂用于细胞转染，经过特殊配方优化，可在悬浮的 EasyStyle™ 293 - F 细胞中实现高效转染，与质粒 DNA 形成的复合物能直接添加到培养基中的细胞内，无需复杂操作。
- pCMV SPORT - βgal 阳性对照质粒：25μg，-20℃保存。作为转染和表达的阳性对照，在人巨细胞病毒（CMV）启动子的控制下，编码 β - 半乳糖苷酶的基因可在 EasyStyle™ 293 - F 细胞中表达。通过检测 β - 半乳糖苷酶的表达，能快速评估转染及表达系统是否正常工作。
- 其他配件：试剂盒还可能包含一些辅助实验的配件，如用于细胞培养的 125 - mL 聚碳酸酯一次性无菌透气盖锥形瓶、无菌一次性聚碳酸酯扣盖管等。
三、细胞培养方法
- 细胞解冻：从液氮罐中取出 EasyStyle™ 293 - F 细胞冻存管，迅速放入 37℃水浴中，轻轻摇晃，直至管内细胞悬液仅剩少量冰渣，整个过程控制在 1 - 2 分钟。随后，将细胞悬液转移至含有 30mL 预热至 37℃的 EasyStyle™ 293 表达培养基的 125 - mL 透气盖锥形瓶中，置于 37℃、135rpm、含 8% CO₂的恒温摇床中培养。
- 细胞传代：当细胞密度达到 6 - 7×10⁵个 /mL 时，进行传代操作。根据细胞密度和培养体积需求，取适量细胞悬液转移至含有新鲜预热培养基的新锥形瓶中，调整细胞密度至适宜传代密度继续培养。一般每 2 - 3 天需进行一次传代，以维持细胞处于对数生长期，保证细胞的健康状态和生长活力。
- 细胞冻存：若需冻存细胞，可使用由 90% 新鲜 EasyStyle™ 293 表达培养基和 10% DMSO 组成的冻存液。将细胞离心收集后，用冻存液重悬细胞，调整细胞密度至 1×10⁷个 /mL 左右，分装至冻存管中，按照程序降温（如先在 - 80℃冰箱过夜，随后转移至液氮长期保存）。
四、转染方法
- 质粒准备：准备纯化的目的质粒 DNA，浓度为 1mg/mL，确保其清洁、无菌，无酚和氯化钠污染，推荐使用高质量的质粒提取试剂盒进行提取。
- 转染复合物制备：在无菌离心管中，用适量的 Opti - MEM I 减血清培养基（可单独购买，若试剂盒中未包含）稀释质粒 DNA；同时，用相同的培养基稀释 EasyStyle™ PLUS 试剂。将稀释后的试剂缓慢加入稀释后的 DNA 溶液中，轻轻混匀，室温下孵育 10 - 15 分钟，形成稳定的转染复合物。
- 细胞转染：取处于对数生长期、密度为 2 - 3×10⁶个 /mL 的 EasyStyle™ 293 - F 细胞培养物，将制备好的转染复合物缓慢加入细胞培养体系中，轻轻摇晃锥形瓶，使复合物与细胞充分接触。随后，将细胞放回 37℃、135rpm、含 8% CO₂的恒温摇床中继续培养。
- 转染后培养：转染后，根据目的蛋白表达特性，可在特定时间点进行收获。一般在转染后 48 - 72 小时，多数蛋白可达到较高表达水平。期间可通过台盼蓝染色结合细胞计数仪或血球计数板监测细胞密度和活力。
五、产品优势
- 高效表达：独特的细胞系与培养基组合，配合优化的转染试剂，可显著提高重组蛋白的表达量，相较于传统 293 表达系统，蛋白产量可提升数倍。
- 操作简便：细胞可直接在试剂盒提供的培养基中解冻、培养与转染，无需复杂的适应过程和额外的培养基更换步骤；转染试剂使用简单，与 DNA 形成复合物后可直接添加到细胞中。
- 实验周期短：从细胞解冻到收获蛋白，整个流程可在一周内完成，大大缩短了实验时间，提高科研效率。
- 质量稳定：试剂盒各组分均经过严格质量控制，确保实验结果的稳定性和重复性，减少实验误差。
六、应用领域
- 基础科研：用于蛋白质结构与功能研究，通过表达不同的重组蛋白，探究其在细胞生理过程中的作用机制。
- 抗体生产：高效表达单克隆抗体或多克隆抗体，满足免疫学实验及相关疾病诊断试剂研发需求。
- 疫苗开发：可表达病毒抗原蛋白，用于新型疫苗的研发与生产工艺探索。
- 药物研发：在药物靶点验证、药物筛选及药物作用机制研究中，表达关键蛋白用于相关实验。
七、注意事项
- 细胞操作需在无菌环境下进行，所有试剂和耗材均需保证无菌状态，避免微生物污染影响细胞生长和实验结果。
- EasyStyle™ 293 表达培养基对光敏感，储存和使用过程中需注意避光，防止培养基成分因光照发生降解。
- EasyStyle™ PLUS 试剂应储存于 4℃，避免冷冻，使用前需轻轻摇匀，若试剂出现浑浊或沉淀则不可再使用。
- 首次使用该试剂盒表达新的蛋白时，建议设置时间梯度实验，确定目的蛋白的最佳收获时间，以获得最高产量。
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