GeticoFect CHO 表达系统试剂盒

在生物制药领域,CHO 细胞凭借其强大的蛋白折叠能力和翻译后修饰功能,成为重组蛋白、单克隆抗体等生物药生产的 “黄金细胞株”。GeticoFect CHO 表达系统试剂盒以革新性技术突破,在经典 CHO 表达体系基础上实现效率与稳定性的双重升级,为从早期研发到中试放大的全流程提供高效支持。

29800
规格: 250801-1L
数量:
库存:999999

GeticoFect CHO 表达系统试剂盒


在生物制药领域,CHO 细胞凭借其强大的蛋白折叠能力和翻译后修饰功能,成为重组蛋白、单克隆抗体等生物药生产的 “黄金细胞株”。GeticoFect CHO 表达系统试剂盒以革新性技术突破,在经典 CHO 表达体系基础上实现效率与稳定性的双重升级,为从早期研发到中试放大的全流程提供高效支持。


核心优势:重新定义 CHO 表达效率


1. 转染效率跃升,蛋白表达量领先

  • 高转染率:采用第三代脂质纳米颗粒(LNP)递送技术,对悬浮 CHO 细胞(如 CHO-S、CHO-DG44)的转染效率可达 95% 以上,较传统试剂提升 30%-50%,即使对于难转染的高密度细胞(≥5×10⁶ cells/mL)仍能保持稳定表现。

  • 表达量突破:在标准摇瓶培养中,重组蛋白表达量可达 3g/L,部分单抗类分子甚至突破 3.5g/L,较同类试剂盒平均水平提升 40%以上,为小体积样品制备提供充足产量。

2. 细胞友好型设计,存活率与活性双保障

  • 低毒性配方:独特的可电离脂质成分在生理 pH 下呈电中性,减少对细胞膜的损伤,转染后 24 小时细胞存活率≥99%(台盼蓝染色法),远高于行业平均的 90%-95%。
  • 长周期稳定性:支持细胞连续 14 天高效表达,培养后期(Day14)存活率仍能维持 100%,解决传统试剂因细胞凋亡导致的表达 “断崖式下降” 问题,尤其适合长效蛋白生产。

3. 操作便捷,兼容多种实验场景

  • 灵活适配:无需复杂预处理,可直接与 ExpiCHO、CD CHO 等主流无血清培养基兼容,支持 96 孔板、T-flask、摇瓶等多种培养容器,满足高通量筛选到中试放大的不同需求。

  • 快速流程:质粒与试剂稀释后仅需 5 分钟孵育,即可完成转染操作,全程无需离心、换液,大幅缩短实验时间,降低人为操作误差。

系统组成:一站式满足表达需求

试剂盒包含转染核心试剂与配套优化组件,为实验提供 “开箱即用” 的便利:


  • GeticoFect CHO 转染试剂:采用高纯度脂质复合物,批次间差异 CV 值<3%,保证实验重复性;


  • Enhancer 增强剂(可选):针对低丰度蛋白表达设计,可进一步提升表达量 20%-30%;

  • 专用无血清培养基

  • 使用手册:包含详细的细胞密度优化、试剂比例调整、培养条件设置等 protocol,附常见问题解决方案。

适用场景:从研发到生产的全链条覆盖

  • 早期研发:快速验证目的基因表达、筛选最优载体构建,支持单克隆抗体制备的高通量克隆筛选;
  • 中试放大:在 50ml-500mL 摇瓶中稳定实现高表达,为工艺放大提供可靠数据参考;
  • 特殊分子表达:尤其适合复杂结构蛋白(如双特异性抗体、融合蛋白)的表达,助力解决折叠错误、糖基化异常等问题。

为什么选择 GeticoFect?

相比传统 CHO 表达系统,GeticoFect 以 “高效 + 稳定 + 便捷” 三大核心优势,重新定义 CHO 细胞表达的效率标准:


  • 相同培养条件下,缩短研发周期 30%,让候选分子更快进入下一阶段;
  • 降低因表达量不足导致的重复实验成本,减少试剂消耗 40%
  • 全程技术支持团队提供个性化方案优化,从细胞复苏到蛋白纯化全程护航。


1. GeticoFect CHO 表达系统试剂盒适用于哪些细胞类型?
该试剂盒专门为中国仓鼠卵巢(CHO)细胞设计,具有高度的适配性与高效性。在 CHO-K1 细胞系中,使用 GeticoFect CHO 表达系统试剂盒,能够实现高水平的蛋白表达。例如,当表达人源化单克隆抗体时,借助试剂盒中的转染试剂以及优化的培养条件,CHO-K1 细胞可以大量生成目标抗体,并且抗体具有良好的活性和纯度,满足科研与生产需求。对于 CHO-S 细胞,此试剂盒同样表现出色,支持其在悬浮培养的条件下高效表达重组蛋白。在生物制药行业,利用 CHO-S 细胞与该试剂盒进行治疗性蛋白的表达,可收获较高的蛋白产量。另外,DG44 细胞在 GeticoFect CHO 表达系统试剂盒的辅助下,也能够稳定表达各种目的蛋白,为基础研究与工业生产提供了有力支持。需要注意的是,该试剂盒主要针对 CHO 细胞系列进行优化,对于非 CHO 细胞类型,可能无法达到预期的表达效果,在使用前应充分评估细胞的适用性,必要时进行预实验。
2. 试剂盒的储存条件和保质期是怎样的?
试剂盒中的各个组分对储存条件有严格要求。转染试剂需要储存于 4°C 环境,严禁冷冻,因为冷冻可能致使试剂中的活性成分失活,影响转染效率。比如,若转染试剂被冷冻后又解冻,其与 DNA 形成复合物以及介导细胞摄取 DNA 复合物的能力会大幅降低,进而减少蛋白表达量。细胞培养相关的试剂,像培养基添加剂等,需要依据其具体特性选择适宜的储存温度,多数情况下为 - 20°C,低温能有效抑制微生物污染以及成分降解,维持试剂的稳定性。试剂盒中的 DNA 载体等核酸类物质,同样适合在 - 20°C 保存,防止核酸降解。在避光且遵循规定温度储存的情况下,试剂盒的保质期通常为 6 个月。随着时间的推移,试剂盒内的部分成分可能会逐渐失去活性。例如,转染试剂中的某些脂质成分可能发生氧化,降低其与 DNA 结合并助力细胞摄取的能力;培养基添加剂中的生长因子等生物活性物质可能降解,影响细胞的生长和蛋白表达。所以,临近保质期时,建议先进行小规模实验,确认试剂盒的有效性后再大规模使用。每次取用试剂盒中的试剂后,应及时密封并放回相应的储存环境,减少外界因素对试剂的影响。
3. 使用 GeticoFect CHO 表达系统试剂盒进行细胞培养和蛋白表达,具体操作步骤是怎样的?
  • 准备工作:提前开启细胞培养间的超净工作台,进行至少 30 分钟的紫外线消毒,确保操作环境无菌。准备好所需的细胞培养耗材,如细胞培养瓶、培养皿、无菌移液器、移液枪头、细胞刮刀等,并进行高压灭菌处理。从液氮罐中取出冻存的 CHO 细胞,迅速放入 37°C 水浴锅中快速解冻,解冻过程中不断轻轻摇晃冻存管,直至细胞悬液完全融化。随后将细胞悬液转移至含有适量完全培养基(如添加了 10% 胎牛血清和 1% 双抗的 F-12K 培养基)的离心管中,1000 rpm 离心 5 分钟,弃去上清液,用新鲜的完全培养基重悬细胞,将细胞接种到细胞培养瓶中,置于 37°C、5% CO₂的细胞培养箱中培养,待细胞长至 80% - 90% 汇合度时进行后续操作。
  • 转染准备:根据实验需求,将目的基因克隆至试剂盒提供的 DNA 载体中,构建重组表达载体。使用无内毒素质粒提取试剂盒提取高质量的重组质粒 DNA。在超净工作台内,准备 2 个无菌的离心管,分别标记为 A 管和 B 管。在 A 管中加入适量的 Opti - MEM 培养基(无血清、无双抗),再加入一定量的重组质粒 DNA,轻轻混匀;在 B 管中加入等量的 Opti - MEM 培养基,然后按照试剂盒说明书的比例加入转染试剂,轻轻混匀,室温静置 5 分钟。之后,将 B 管中的转染试剂混合液逐滴加入到 A 管的 DNA 混合液中,边加边轻轻混匀,室温静置 20 分钟,使转染试剂与 DNA 充分形成复合物。
  • 细胞转染:将培养瓶中的 CHO 细胞用 PBS 缓冲液清洗 2 次,去除残留的培养基。加入适量的无血清培养基(如 Opti - MEM 培养基),然后将制备好的转染试剂 - DNA 复合物缓慢滴加到细胞培养瓶中,轻轻摇晃培养瓶,使复合物均匀分布在细胞表面。将细胞培养瓶放回 37°C、5% CO₂的细胞培养箱中继续培养 4 - 6 小时。
  • 更换培养基及培养:4 - 6 小时后,取出细胞培养瓶,吸去含有转染复合物的培养基,加入适量的完全培养基(根据细胞生长情况,可选择添加或不添加试剂盒中的培养基添加剂),继续在细胞培养箱中培养。在培养过程中,定期观察细胞的生长状态,可通过显微镜观察细胞形态、密度等。一般在转染后 24 - 72 小时,细胞会开始表达目的蛋白,可根据实验目的,在合适的时间点收集细胞或细胞培养上清液进行后续分析。
  • 蛋白检测与分析:若目的蛋白分泌到细胞培养上清液中,可直接收集上清液,通过 ELISA、Western blot 等方法检测蛋白的表达水平和纯度。若目的蛋白在细胞内表达,需先收集细胞,用细胞裂解液裂解细胞,然后通过离心等方法获取细胞裂解上清液,再进行蛋白检测和分析。例如,使用 SDS - PAGE 凝胶电泳分离蛋白,转膜后用相应的抗体进行 Western blot 检测,确定目的蛋白的分子量和表达量。
4. 试剂盒中的试剂成分安全吗,操作时有哪些注意事项?
试剂盒中的试剂成分经过严格的安全性评估,在正常使用的情况下,对操作人员的健康风险较低,但仍需遵循安全操作规程。转染试剂虽然没有高毒性,但可能对皮肤和眼睛有一定的刺激性。操作人员必须佩戴一次性手套,避免试剂直接接触皮肤。若不慎接触,应立即用大量清水冲洗接触部位 15 分钟以上,若出现红肿、瘙痒等不适症状,需及时就医。同时,要佩戴护目镜,防止试剂溅入眼睛,一旦试剂入眼,应迅速用大量清水冲洗,并尽快前往医院进行专业处理,切不可揉搓眼睛,以免加重损伤。细胞培养相关试剂,如培养基添加剂,可能含有生物活性物质,虽一般无直接毒性,但在操作过程中也应避免吸入其挥发气体。操作应在通风良好的超净工作台内进行,减少潜在的呼吸道刺激风险。对于试剂盒中的 DNA 载体等核酸类物质,本身没有明显毒性,但要防止其被微生物污染,以免影响实验结果。在使用过程中,不同实验样本务必使用专用的移液器和吸头,防止样本间交叉污染。例如,在进行不同目的基因的转染实验时,若共用同一移液器且未彻底清洗,可能导致不同基因的 DNA 相互污染,影响实验的准确性。使用完毕后,剩余的试剂盒试剂应及时放回相应的储存环境,防止其在常温下长时间放置而失效。对于含有试剂盒试剂的废弃液体和细胞培养废弃物,应按照当地实验室废弃物处理规定进行妥善处置,不可随意丢弃。尤其是含有细胞的废弃物,可能携带潜在的生物危害,需进行高压灭菌等无害化处理后,再进行后续处理。
5. GeticoFect CHO 表达系统试剂盒促进蛋白表达的原理是什么?
该试剂盒通过多种机制协同作用来促进蛋白表达。首先,试剂盒中的转染试剂能够与 DNA 形成稳定的复合物,这种复合物可以有效地被 CHO 细胞摄取。转染试剂一般由阳离子脂质体等成分组成,其阳离子头部能够与带负电荷的 DNA 通过静电作用结合,形成具有一定结构的复合物。当复合物接近细胞表面时,由于细胞膜的流动性和电荷特性,复合物能够与细胞膜相互作用,通过内吞等方式进入细胞内部。进入细胞后,复合物在细胞内的溶酶体等细胞器作用下,逐步释放出 DNA,使 DNA 能够进入细胞核进行转录。其次,试剂盒提供的细胞培养相关试剂,如培养基添加剂,为细胞提供了适宜的生长环境和丰富的营养物质。这些添加剂中可能含有多种生长因子、氨基酸、维生素等成分。生长因子能够与细胞表面的受体结合,激活细胞内一系列信号转导通路,促进细胞的增殖和代谢活动,为蛋白表达提供更多的原料和能量。氨基酸是合成蛋白质的基本单位,充足的氨基酸供应能够保证细胞在转录出 mRNA 后,顺利进行蛋白质的翻译过程。维生素等成分则参与细胞内的多种酶促反应,维持细胞内环境的稳定,有助于提高蛋白表达的效率和质量。此外,试剂盒中的 DNA 载体经过精心设计,具有高效的启动子和增强子元件。启动子能够与 RNA 聚合酶等转录相关因子结合,启动基因的转录过程,而增强子则可以远距离作用于启动子,增强转录的效率,从而使目的基因能够大量转录出 mRNA,进一步提高蛋白表达水平。通过这些成分和机制的协同作用,GeticoFect CHO 表达系统试剂盒为 CHO 细胞高效表达目的蛋白提供了有力保障。
6. 使用该试剂盒进行蛋白表达,蛋白表达效果受哪些因素影响?
  • 细胞状态:CHO 细胞的代数、生长密度以及健康状况对蛋白表达效果影响显著。低代数的 CHO 细胞,其遗传稳定性和细胞活力相对较高,更有利于蛋白表达。随着传代次数的增加,细胞可能会出现遗传变异、生长特性改变等情况,导致对转染试剂的敏感性降低,蛋白表达效率下降。例如,高代数的 CHO 细胞在转染后,目的蛋白的表达量可能仅为低代数细胞的 50% - 70%。细胞生长密度也很关键,当细胞密度过高时,细胞之间竞争营养物质和生长空间,会导致细胞生长缓慢,代谢异常,影响蛋白表达。一般来说,在细胞长至 80% - 90% 汇合度时进行转染,蛋白表达效果较好。若细胞受到支原体、细菌等微生物污染,细胞的代谢环境会被破坏,即使使用该试剂盒,蛋白表达也会受到严重抑制,甚至无法检测到目的蛋白的表达。
  • 转染操作:转染试剂与 DNA 的比例是影响转染效率和蛋白表达的重要因素。不同的目的基因和 DNA 载体可能需要不同的转染试剂与 DNA 比例。若比例不当,可能导致转染效率低下,如转染试剂过多,可能对细胞产生毒性,使细胞死亡率增加,同时也会影响 DNA 复合物的形成和细胞摄取;若转染试剂过少,则 DNA 无法有效地被包裹和运输进入细胞,降低蛋白表达水平。在制备转染试剂 - DNA 复合物时,操作是否规范也很关键。混合不均匀、静置时间不足等都可能影响复合物的质量,进而影响转染效果和蛋白表达。例如,在混合转染试剂和 DNA 时,若未充分混匀,可能导致部分 DNA 未与转染试剂结合,无法被细胞摄取,从而降低蛋白表达量。
  • 培养条件:细胞培养箱的温度、CO₂浓度和湿度对细胞生长和蛋白表达有重要影响。温度偏离 37°C,会影响细胞内酶的活性,进而影响细胞的代谢和蛋白表达过程。CO₂浓度不合适会改变培养基的 pH 值,CHO 细胞适宜在 pH 7.2 - 7.4 的环境中生长,pH 值过高或过低都会影响细胞的生理状态和蛋白表达。培养环境的湿度不足,会导致培养基水分蒸发,使培养基成分浓缩,影响细胞生长和蛋白表达。此外,培养基的质量和是否添加试剂盒中的培养基添加剂也会影响蛋白表达。不同品牌或批次的培养基,其营养成分和质量可能存在差异,与试剂盒的兼容性也可能不同。若培养基质量不佳或与试剂盒不兼容,可能导致细胞生长不良,蛋白表达量降低。而添加合适的培养基添加剂,能够为细胞提供更适宜的生长环境,促进蛋白表达。
7. 按照操作步骤使用试剂盒,却发现蛋白表达不理想,可能是什么原因?
  • 细胞相关原因
  • 细胞污染:细胞可能受到支原体、细菌、真菌等微生物污染。支原体污染较为隐匿,它会与细胞争夺营养物质,改变细胞的代谢环境,导致细胞生长缓慢,对转染试剂的敏感性降低,从而影响蛋白表达。可通过支原体检测试剂盒进行检测,若检测结果为阳性,需及时处理污染细胞,同时对培养环境和器材进行彻底消毒。细菌和真菌污染相对容易观察到,培养基会出现浑浊、变色,显微镜下可见大量微生物,此时细胞生长会受到严重抑制,蛋白表达无法正常进行,需立即丢弃污染细胞,重新复苏无污染的细胞进行实验。
  • 细胞特性改变:CHO 细胞在长期传代过程中可能发生基因突变或表观遗传改变,导致其对转染试剂和培养条件的需求发生变化。原本适合的转染试剂浓度和培养条件可能不再适用,蛋白表达不理想。例如,某些 CHO 细胞在多次传代后,可能对特定转染试剂的摄取能力下降,需要重新优化转染条件。可通过对细胞进行全基因组测序或相关功能检测,分析细胞特性是否发生改变。
  • 操作相关原因
  • 转染试剂与 DNA 比例不当:移液器长时间使用未校准,或者在吸取转染试剂和 DNA 时操作不当,会导致转染试剂与 DNA 比例错误。若转染试剂相对 DNA 过多,可能对细胞产生毒性,影响细胞存活和蛋白表达;若转染试剂相对 DNA 过少,转染效率会降低,导致进入细胞的 DNA 量不足,蛋白表达量也会随之减少。可使用高精度电子天平对移液器进行校准,通过称量移取的纯水重量,根据水的密度计算实际移液体积,与设定体积进行比对,确保移液器的准确性。在进行转染试剂与 DNA 混合时,严格按照操作规范进行,多次重复吸取和混合,保证两者充分混匀。
  • 转染复合物制备不规范:在制备转染试剂 - DNA 复合物时,若混合顺序错误、静置时间不足或未在合适的温度下操作,都会影响复合物的质量。例如,未按照先将转染试剂与培养基混合,再与 DNA 混合的顺序操作,可能导致复合物无法正常形成。静置时间过短,转染试剂与 DNA 不能充分结合,影响细胞摄取。应严格按照试剂盒说明书的要求进行转染复合物的制备,确保操作规范。
  • 培养环境不稳定:细胞培养箱的温度、CO₂浓度和湿度若出现波动,会影响细胞的生长环境,进而影响蛋白表达。温度不稳定可能导致细胞内酶活性异常,影响蛋白表达相关的代谢过程;CO₂浓度波动会改变培养基的 pH 值,使细胞生长环境不适宜;湿度不足会导致培养基水分蒸发,影响培养基成分的浓度。定期对细胞培养箱进行维护和校准,使用温湿度计和 CO₂浓度检测仪监测培养箱内的环境参数,确保其处于稳定的适宜范围。
  • 试剂相关原因
  • 试剂盒试剂失效:试剂盒超过保质期,或者储存条件不当(如温度过高、光照、转染试剂冷冻等),会使其中的试剂成分失活。例如,转染试剂中的脂质成分可能发生氧化,失去与 DNA 结合并介导细胞摄取的能力;培养基添加剂中的生长因子等生物活性物质可能降解。可使用已知有效的细胞和目的基因对试剂盒试剂进行验证,若在正常操作下,蛋白表达仍不理想,提示试剂盒试剂可能失效,需更换新的试剂盒。
  • DNA 载体问题:构建的重组 DNA 载体可能存在问题,如目的基因插入错误、启动子或增强子元件受损等。这会导致目的基因无法正常转录或转录效率低下,从而影响蛋白表达。在构建 DNA 载体后,应进行测序验证,确保目的基因正确插入,载体元件完整且功能正常。
8. GeticoFect CHO 表达系统试剂盒可以和其他品牌的细胞培养试剂搭配使用吗?
GeticoFect CHO 表达系统试剂盒具备一定的兼容性,可以和部分其他品牌的细胞培养试剂搭配使用,但需要谨慎评估并进行预实验。在细胞培养基方面,一些常见品牌的基础培养基,如 F-12K、DMEM/F12 等,其主要成分相近,基本能够满足 CHO 细胞的生长需求,可与试剂盒中的培养基添加剂搭配使用。例如,使用 Gibco 品牌的 F-12K 培养基,添加 GeticoFect CHO 表达系统试剂盒中的培养基添加剂,用于培养 CHO 细胞并进行蛋白表达,细胞能够正常生长,蛋白也能有一定水平的表达。然而,不同品牌基础培养基在成分浓度、缓冲体系等方面可能存在差异,这可能会影响试剂盒中试剂的效果。某些基础培养基中较高的离子浓度可能与试剂盒中的培养基添加剂发生相互作用,影响添加剂中生物活性成分的稳定性和有效性。在转染试剂方面,虽然试剂盒自带的转染试剂经过优化,与试剂盒其他成分兼容性良好,但在特殊情况下,若需要尝试其他品牌的转染试剂,也应先进行小范围预实验。不同品牌转染试剂的作用机制、配方和适用细胞类型可能有所不同,与试剂盒中的 DNA 载体和 CHO 细胞的兼容性也需验证。例如,某些转染试剂可能更适合特定类型的细胞或 DNA 载体,在用于 CHO 细胞和该试剂盒的 DNA 载体时,可能无法达到预期的转染效率和蛋白表达水平。因此,在将 GeticoFect CHO 表达系统试剂盒与其他品牌的细胞培养试剂搭配使用前,务必进行充分的预实验,观察细胞生长情况、转染效率以及蛋白表达效果等指标,根据实验结果确定是否能够兼容使用,避免因试剂不兼容导致实验失败。


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