Gquant microRNA Assay Kit

在现代分子生物学研究中,对微小 RNA(microRNA,miRNA)进行精准定量分析是深入探究基因调控机制、疾病诊断与治疗等领域的关键环节。Gquant microRNA 检测试剂盒与 Qubit 荧光计定量仪的完美结合,为科研人员提供了一种轻松且准确的 miRNA 定量解决方案,即使样品中存在盐、游离核苷酸、溶剂、去污剂和蛋白等常见污染物,也能确保检测结果的可靠性。该检测试剂展现出了对 miRNA 高度的选择性。相较于核糖体 RNA(rRNA)或较大的信使 RNA(mRNA,长度 > 1000 bp),它能够精准地识别并定量 miRNA。尽管该试剂并非绝对只针对 miRNA 具有选择性,但依据我们提供的专业方案,科研人员能够在 mRNA 存在的复杂环境下,于试验管中对低至 0.5 ng 的纯样品中的 miRNA 进行重复且准确的定量分析。

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产品名称产品编号规格价格(元)
Gquant microRNA Assay Kit120901100 次(可进行 250 次检测反应)950.00
Gquant microRNA Assay Kit120902500 次(可进行 1250 次检测反应)2500.00
Gquant microRNA Assay Kit1209031000 次(可进行 2500 次检测反应)4000.00


产品描述


在现代分子生物学研究中,对微小 RNA(microRNA,miRNA)进行精准定量分析是深入探究基因调控机制、疾病诊断与治疗等领域的关键环节。Gquant microRNA 检测试剂盒与 Qubit 荧光计定量仪的完美结合,为科研人员提供了一种轻松且准确的 miRNA 定量解决方案,即使样品中存在盐、游离核苷酸、溶剂、去污剂和蛋白等常见污染物,也能确保检测结果的可靠性。


该检测试剂展现出了对 miRNA 高度的选择性。相较于核糖体 RNA(rRNA)或较大的信使 RNA(mRNA,长度 > 1000 bp),它能够精准地识别并定量 miRNA。尽管该试剂并非绝对只针对 miRNA 具有选择性,但依据我们提供的专业方案,科研人员能够在 mRNA 存在的复杂环境下,于试验管中对低至 0.5 ng 的纯样品中的 miRNA 进行重复且准确的定量分析。


Gquant microRNA 检测的显著特点


  1. 超高灵敏度:能够准确检测试验管内低至 0.5 ng 的 miRNA,为研究微量 miRNA 提供了可能,满足了科研人员对低丰度 miRNA 进行精确分析的需求。

  2. 宽广的核心动态范围:核心动态范围可达 5–500 ng/mL,这意味着该检测方法在较宽的浓度区间内都能保持良好的检测性能,能够适应不同样品中 miRNA 浓度的差异。

  3. 广泛的浓度适应性:在 50 ng/mL 至 100 μg/mL 的样品浓度范围内,均能获得准确可靠的检测结果。这使得该试剂盒在面对不同来源、不同浓度的样品时,都能为科研人员提供精准的数据支持。


便捷的操作流程


Gquant microRNA 检测试剂盒为用户提供了浓缩的检测试剂、稀释缓冲液以及预稀释的 miRNA 标准品。操作过程简单便捷,科研人员只需使用提供的缓冲液对试剂进行稀释,然后加入 1 μL 至 20 μL 任意体积的样品,即可使用 Qubit 荧光计读取浓度值。由于检测体系能够在 200 μL 的检测体积下承受 1–20 μL 的样品,因此能够对初始样品浓度在 50 ng/mL–100 μg/mL 范围内的样品进行准确检测,为科研工作节省了时间和精力,提高了实验效率。



1. Gquant microRNA Assay Kit 适用于哪些样本类型?
Gquant microRNA Assay Kit 在微小核糖核酸(microRNA)定量检测方面,具有广泛的样本适用性。对于细胞相关样本,如细胞裂解液,无论是原核细胞还是真核细胞的裂解产物,该试剂盒均能精准测定其中的 microRNA 含量,为细胞生理功能、基因表达调控等研究提供关键数据。组织匀浆同样适用,涵盖了动物的各种组织,如肝脏、肌肉、脑组织匀浆等,通过检测组织匀浆中的 microRNA 含量,有助于了解组织的代谢状态、疾病发生机制等。在体液样本中,血清、血浆(包括 EDTA 血浆、肝素血浆)以及尿液都能被有效检测。在临床诊断中,通过检测血清、血浆或尿液中特定 microRNA 的含量,可辅助疾病的诊断、病情监测以及治疗效果评估,例如在肿瘤、心血管疾病等的研究中发挥重要作用。此外,细胞培养上清液也是适用的样本类型之一,在细胞培养实验中,通过测定培养上清液中的 microRNA 含量,能够了解细胞分泌 microRNA 的情况,对研究细胞间通讯、细胞因子分泌等具有重要意义。需要注意的是,对于富含高浓度核酸、多糖、脂类等杂质,或者含有特殊化学物质(如某些强还原剂、螯合剂)的样本,在检测前必须进行针对性的预处理,如核酸酶消化去除核酸、超速离心分离脂类等,或者先进行小范围预实验,以评估试剂盒对该样本的适用性,从而保证检测结果的精准可靠。
2. 试剂盒的储存条件和保质期分别是怎样的?
正确的储存条件对维持 Gquant microRNA Assay Kit 的性能稳定起着决定性作用。试剂盒中的关键检测试剂,如逆转录酶、荧光定量 PCR 预混液等,通常需存放在 - 20°C 的低温环境中。这是因为在这样的低温条件下,试剂中的活性成分能够最大程度保持稳定,避免发生降解或化学反应,防止其检测灵敏度和特异性受到损害。若储存温度过高,例如高于 - 15°C,试剂中的某些成分可能会逐渐分解,致使检测信号减弱,进而影响检测结果的准确性。对于试剂盒内的标准品,同样建议储存于 - 20°C 环境,以保证其浓度的长期稳定性,确保在实验过程中能够为 microRNA 定量提供精准的校准依据。值得注意的是,试剂盒中的荧光染料对光极为敏感,因此应将其保存在避光的琥珀色管中,防止光照引发染料的光化学反应,降低其与 microRNA 的结合能力。在遵循上述严格储存条件的情况下,试剂盒的保质期一般可达 12 个月。随着保质期临近,试剂盒的性能可能会出现一定程度的下滑。例如,临近保质期时,检测试剂与 microRNA 的结合效率可能降低,导致标准曲线的线性度变差,样本 microRNA 含量的测量误差增大。所以,在保质期即将到期时,建议先进行少量标准样本和已知浓度样本的检测,仔细观察检测结果的准确性、重复性等指标,确认试剂盒仍能满足实验要求后,再大规模用于正式实验。每次取用试剂盒中的试剂后,务必迅速密封,并及时放回规定的储存环境,避免因温度波动、光照、湿度变化等外界因素干扰,致使试剂性能下降。
3. 使用 Gquant microRNA Assay Kit 进行 microRNA 定量,具体操作步骤是怎样的?
  • 准备工作:提前开启超净工作台,进行不少于 30 分钟的紫外线杀菌处理,营造无菌的操作环境。准备好所需的各类实验耗材,如无菌的 96 孔板、高精度移液器、配套移液枪头、离心管等,并对这些耗材进行高压蒸汽灭菌,确保无微生物污染。从 - 20°C 冰箱取出试剂盒后,将其置于室温环境下平衡 30 分钟,使试剂温度与室温一致,防止因温度差异导致实验过程中出现冷凝水等影响实验结果的因素。同时,对待检测的 microRNA 样本进行预处理,若样本为细胞裂解液,需通过高速离心去除细胞碎片等杂质;若为组织匀浆,可能需要进一步过滤以提高样本的纯净度,为后续准确检测奠定基础。
  • 标准曲线绘制:取出试剂盒中的标准品(通常为已知浓度的 microRNA 模拟物),严格按照试剂盒说明书,用配套的稀释缓冲液对标准品进行梯度稀释。一般可制备一系列浓度梯度的标准品溶液,如 0 ng/μl、0.05 ng/μl、0.1 ng/μl、0.5 ng/μl、1 ng/μl、2 ng/μl、5 ng/μl 等。在 96 孔板中,每孔精确加入适量(如 10 μl)不同浓度的标准品溶液,为保证数据的可靠性和准确性,每个浓度至少设置 3 个复孔。
  • 样本处理与加样:根据预估的 microRNA 样本浓度,对样本进行合理稀释。稀释倍数的选择要确保稀释后的样本浓度处于试剂盒的有效检测范围内。在 96 孔板的其他孔中,每孔加入 10 μl 稀释后的样本溶液,同样每个样本设置至少 3 个复孔,以便后续取平均值,减小实验误差。
  • 试剂添加与反应:向含有标准品和样本的 96 孔板各孔中,分别加入 20 μl 的逆转录反应液。加液后,使用微型振荡器或轻轻振荡 96 孔板,使溶液充分混合均匀,确保逆转录反应液中的逆转录酶与 microRNA 充分接触并发生反应。将 96 孔板置于 PCR 仪中,按照试剂盒说明书规定的程序进行逆转录反应,将 microRNA 逆转录为 cDNA。逆转录反应结束后,向各孔中加入 20 μl 的荧光定量 PCR 预混液,再次振荡混合均匀。将 96 孔板放回 PCR 仪中,按照设定的荧光定量 PCR 程序进行扩增反应,在此期间,荧光定量 PCR 预混液中的荧光染料会与扩增产物特异性结合,荧光信号强度与 microRNA 的初始含量呈正相关。
  • 检测读数:扩增反应结束后,将 96 孔板小心放入荧光定量 PCR 仪中,读取各孔的荧光信号强度值(Ct 值)。以标准品的浓度为横坐标,对应的 Ct 值为纵坐标,运用数据分析软件或手工绘制标准曲线。通过标准曲线,根据样本的 Ct 值,利用线性回归等方法计算出样本中 microRNA 的准确含量。
4. 试剂盒中的试剂成分安全吗,操作时有哪些注意事项?
在正常规范使用的前提下,Gquant microRNA Assay Kit 中的试剂成分对操作人员的健康危害相对较低,但仍不可忽视安全操作的重要性。试剂盒中的逆转录酶、荧光定量 PCR 预混液等试剂,可能会对皮肤和眼睛产生一定程度的刺激。因此,操作人员在实验过程中必须全程佩戴一次性防护手套,防止试剂直接接触皮肤。一旦皮肤不慎接触到试剂,应立即用大量流动清水冲洗接触部位至少 15 分钟,若冲洗后皮肤出现红肿、瘙痒、刺痛等不适症状,需尽快就医诊治。同时,要佩戴护目镜,有效防止试剂溅入眼睛。若试剂不慎入眼,应迅速用大量清水冲洗眼睛,冲洗过程中需转动眼球,确保眼睛各部位都能被冲洗到,随后立即前往医院进行专业处理,切不可揉搓眼睛,以免加重眼部损伤。试剂盒中的标准品溶液,虽然一般毒性较低,但也应避免误食。在操作现场,严禁饮食、吸烟等行为,防止因误食试剂而对身体造成伤害。在使用移液器吸取试剂时,要确保移液器经过校准且性能良好,吸头安装紧密,避免试剂泄漏。对于使用过的实验耗材,如吸头、96 孔板等,必须严格按照实验室废弃物处理规范进行妥善处置。尤其是接触过生物样本的废弃物,可能携带生物危害因子,需先进行高压灭菌等无害化处理后,再按照相关规定进行后续处理,以保障实验室环境安全,防止交叉污染。
5. Gquant microRNA Assay Kit 检测 microRNA 的原理是什么?
Gquant microRNA Assay Kit 基于先进的逆转录 - 荧光定量 PCR(RT-qPCR)原理实现 microRNA 的高灵敏度定量检测。其核心检测过程包括两个关键步骤:逆转录反应和荧光定量 PCR 反应。在逆转录反应阶段,试剂盒中的逆转录酶能够以 microRNA 为模板,在引物的引导下,将其逆转录为互补 DNA(cDNA)。引物的设计具有高度特异性,能够与 microRNA 的特定序列结合,确保逆转录反应准确进行。在荧光定量 PCR 反应阶段,以逆转录生成的 cDNA 为模板,在 Taq 酶的作用下进行扩增。荧光定量 PCR 预混液中含有一种特殊的荧光染料,如 SYBR Green I。在 PCR 扩增过程中,当双链 DNA 解链为单链时,荧光染料能够嵌入双链 DNA 的小沟中,与双链 DNA 特异性结合。随着 PCR 循环的进行,扩增产物不断增加,与荧光染料结合的量也相应增加,荧光信号强度随之增强。并且,在试剂盒所设定的线性检测范围内,microRNA 的初始含量与荧光信号强度(通过 Ct 值反映)呈现良好的线性负相关关系。通过精确测量样本在荧光定量 PCR 过程中的 Ct 值,并与已知浓度的标准品溶液在相同实验条件下测得的 Ct 值进行对比,绘制标准曲线,进而依据标准曲线准确计算出样本中 microRNA 的含量。这种检测原理赋予了试剂盒高灵敏度和准确性,能够满足从基础科研到临床诊断等多个领域对 microRNA 定量检测的严苛需求。
6. 使用该试剂盒进行 microRNA 定量,检测结果受哪些因素影响?
  • 样本因素:样本的纯度对检测结果的准确性影响显著。若样本中存在大量杂质,如基因组 DNA、蛋白质、多糖、脂类等,这些杂质可能会与检测试剂发生非特异性相互作用,干扰逆转录反应和荧光定量 PCR 反应,最终导致检测结果偏高或偏低。例如,当样本中基因组 DNA 含量较高时,基因组 DNA 可能会与引物结合,竞争逆转录酶和荧光定量 PCR 预混液,使扩增信号异常增加或减少,从而错误地抬高或降低 microRNA 含量的测定值。样本的完整性也是关键影响因素之一,由于 microRNA 分子较小,容易受到核酸酶的降解,若样本在采集、处理或储存过程中受到核酸酶污染,导致 microRNA 降解,会使检测结果偏低。此外,样本中 microRNA 的结构和性质差异也不容忽视,不同类型的 microRNA,其序列、二级结构等各不相同,与逆转录引物和荧光染料的结合亲和力也有所差异,这可能导致在相同含量下,不同 microRNA 产生的检测信号强度不同,从而影响 microRNA 含量的准确测定。
  • 操作因素:移液器的精准度是影响实验结果的重要操作因素。若移液器长时间未校准,或者在吸取标准品、样本及检测试剂时操作不当,如吸头未正确安装、吸取液体时产生气泡等,都会导致移液体积不准确,直接影响逆转录反应和荧光定量 PCR 反应的体系组成,进而严重干扰 microRNA 含量的计算结果。例如,移液器吸取的样本体积偏少,会使测得的 Ct 值偏大,最终计算出的 microRNA 含量也会相应偏低。在混合试剂和样本时,若混合不均匀,会造成局部反应不充分,使得荧光信号强度测量不能真实反映样本中 microRNA 的实际含量。在逆转录反应和荧光定量 PCR 反应过程中,反应条件的精确控制至关重要。反应温度、时间的偏差,会改变逆转录酶和 Taq 酶的活性,影响反应速率和扩增效率,对检测结果产生不利影响。例如,逆转录反应温度过高或过低,会导致逆转录效率降低,使 cDNA 合成量减少,最终影响荧光定量 PCR 的检测信号。
  • 仪器因素:荧光定量 PCR 仪作为检测荧光信号强度的关键仪器,其性能和状态直接关系到检测结果的可靠性。荧光定量 PCR 仪的荧光检测灵敏度、波长准确性、温度均一性等指标若不准确,会导致测得的荧光信号强度值出现偏差。例如,荧光定量 PCR 仪的荧光检测灵敏度下降,可能无法准确检测到低含量 microRNA 样本的荧光信号,使 Ct 值偏大,从而影响 microRNA 含量的计算准确性。此外,荧光定量 PCR 仪的光源老化、检测器故障等问题,也可能导致荧光信号测量不准确,降低检测结果的可信度。同时,使用的 96 孔板的质量也不容忽视,若 96 孔板各孔之间的透光性存在差异,会在测量荧光信号强度时引入误差,影响检测结果的一致性和准确性。
7. 按照操作步骤使用试剂盒,却发现检测结果不准确,可能是什么原因?
  • 样本相关原因
  • 样本污染:样本在采集、处理或储存过程中可能受到其他物质的污染。例如,在样本采集时,若使用了未经严格清洁和灭菌的器材,可能引入基因组 DNA、蛋白质等杂质。这些杂质会与检测试剂发生反应,干扰 microRNA 定量的准确性。针对这种情况,可对样本进行进一步的纯化处理,如使用 DNase 降解基因组 DNA 污染,或者通过离心、过滤等物理方法去除其他杂质,之后重新进行检测。
  • 样本处理不当:样本的稀释倍数不准确是导致检测结果异常的常见原因之一。若稀释倍数过大,样本中 microRNA 含量过低,可能低于试剂盒的检测下限,使检测结果不准确;若稀释倍数过小,样本中 microRNA 含量过高,超出试剂盒的检测上限,同样会影响结果的准确性。此时,应重新准确估算样本中 microRNA 的含量,选择合适的稀释倍数,对样本进行精确稀释后再次进行检测。
  • 操作相关原因
  • 移液器误差:移液器长时间频繁使用后,可能出现校准不准确的情况,或者在操作过程中存在不规范行为,如吸头未紧密安装、吸取液体时速度过快产生气泡等,这些都会导致移液体积出现偏差。为解决这一问题,可使用高精度电子天平对移液器进行校准,通过称量移取的纯水重量,根据水的密度精确计算实际移液体积,并与设定体积进行对比,确保移液器的准确性。在操作移液器时,务必严格按照规范流程进行,选择适配的吸头并确保安装牢固,吸取液体时动作要缓慢、平稳,避免产生气泡。
  • 反应条件控制不当:逆转录反应和荧光定量 PCR 反应的温度、时间未严格遵循试剂盒说明书的要求进行控制。反应温度过高或过低,时间过长或过短,都会影响逆转录酶和 Taq 酶的活性,导致反应效率降低,扩增产物量减少或增多,最终影响检测结果的准确性。因此,应重新设置反应条件,严格按照说明书规定的温度和时间进行反应,然后再次进行检测。在混合试剂和样本时,若混合不充分,会导致局部反应不一致,影响荧光信号强度的准确测量。所以,在加入检测试剂后,必须充分振荡 96 孔板,确保试剂与样本均匀混合。
  • 仪器相关原因
  • 荧光定量 PCR 仪故障:荧光定量 PCR 仪的荧光检测灵敏度下降、波长不准确、温度均一性差等问题,都可能导致检测结果不准确。例如,荧光定量 PCR 仪的荧光检测灵敏度下降,可能无法准确检测到低含量 microRNA 样本的荧光信号,使 Ct 值偏大,从而影响 microRNA 含量的计算准确性。为确保荧光定量 PCR 仪的正常运行,应定期对其进行校准和维护,使用标准荧光物质或标准样本对荧光定量 PCR 仪的荧光检测灵敏度、波长准确性、温度均一性等指标进行检测和校准。若发现荧光定量 PCR 仪存在故障,应及时联系专业维修人员进行维修。
  • 96 孔板质量问题:使用的 96 孔板可能存在质量缺陷,如各孔之间的透光性不一致,这会在测量荧光信号强度时导致误差。可尝试更换质量可靠、经过严格质量检测的 96 孔板,重新进行实验,观察检测结果是否得到改善。
8. Gquant microRNA Assay Kit 可以和其他品牌的相关试剂搭配使用吗?
在特定情况下,Gquant microRNA Assay Kit 具备与部分其他品牌相关试剂搭配使用的可能性,但在实际搭配使用之前,必须进行谨慎评估并开展充分的预实验。在样本稀释环节,一些知名品牌的缓冲液,如常见的 Tris - HCl 缓冲液、PBS 缓冲液等,若其 pH 值和离子强度与试剂盒的要求相近,理论上可用于稀释样本。例如,使用 Sigma 品牌的 PBS 缓冲液稀释 microRNA 样本后,再采用该试剂盒进行检测,在某些实验条件下能够获得较为准确的 microRNA 定量结果。然而,不同品牌缓冲液的具体成分和浓度存在差异,可能会对检测结果产生潜在影响。某些缓冲液中含有的特殊添加剂,可能会与试剂盒中的检测试剂发生相互作用,干扰逆转录反应和荧光定量 PCR 反应,导致检测结果出现偏差。在标准品方面,尽管试剂盒本身配备了标准品,但在特殊实验需求下,若考虑使用其他品牌的标准品,同样需要预先进行验证。不同品牌标准品的纯度、稳定性以及与检测试剂的反应活性可能各不相同,这可能会对标准曲线的准确性产生影响,进而干扰样本 microRNA 含量的计算。例如,使用其他品牌的 microRNA 模拟物作为标准品时,其与试剂盒中逆转录引物和荧光染料的结合能力可能与试剂盒自带标准品存在差异,导致标准曲线的斜率发生变化。因此,在将 Gquant microRNA Assay Kit 与其他品牌的相关试剂搭配使用之前,务必开展全面的预实验,对比不同试剂组合下的检测结果,重点观察标准曲线的线性关系、检测结果的准确性和重复性等关键指标,根据实验结果综合判断是否能够兼容使用,避免因试剂不兼容而导致实验失败,造成时间和资源的浪费。


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